硫化镉量子点与限制性内切酶EcoRI相互作用的研究

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纳米生物技术是当今前沿科学的研究热点内容之一,CdS QDs具有独一无二的光化学特性,较高的表面积和表面能可以对生物分子产生很强的吸附作用。使其为纳米生物技术提供一个很好的载体平台。而EcoRI是特殊的限制性内切酶,起到保护生命体原有遗传信息的作用。但限制性内切酶EcoRI是否具有生理功能取决于它们的空间结构。研究蛋白质与纳米粒子复合物中蛋白质的构象行为对纳米粒子应用于探测生物过程,作为检测生物体内某些重要分析物的报告者有重要的研究意义。具体做了以下工作:1.第一部分用简单的水热合成方法合成了MUA(十一基巯酸)包裹的CdSQDs,用紫外-可见光谱,荧光光谱,圆二色光谱,凝胶电泳和红外光谱来作为研究的基本手段,分析研究EcoRI与CdS QDs的相互作用及EcoRI-CdS QDs复合物中EcoRI的构象变化。结果表明在pH6.0条件下CdS QDs对EcoRI的猝灭方式为静态猝灭,两者间的作用方式主要为静电引力,FTIR和CD光谱证明了在结合的过程中EcoRI的二级构象都是伴随着α-螺旋和转角构象含量减少,β-折叠和无序结构的含量增加。虽然EcoRI在纳米粒子表面的吸附导致了构象变化,但凝胶电泳发现复合物中EcoRI的活性任然存在。2.第二部分进行一系列的实验研究一定粒径范围的CdS QDs与EcoRI间的相互作用。用Hill理论研究了EcoRI对CdS QDs的猝灭方式,发现EcoRI与CdS QDs的平衡常数和代表着协同性的Hill参数n与CdS QDs的粒径密切相关。并且发现EcoRI吸附在不同粒径CdS QDs上时,其构象变化是不同的。从凝胶电泳分析结果看,α-螺旋结构的减少或多或少影响着酶的活性。3.第三部分用溶剂热法合成了尾端含有不同官能团(-OH,-CH3)的CdSQDs,探讨官能团对CdS QDs与EcoRI间的相互作用的影响,并研究EcoRI-CdSQDs复合物中EcoRI构象变化。聚丙烯酰胺凝胶电泳发现,CdS QDs与EcoRI的结合力因为官能团疏水性强弱而不同。用UV可见光谱,荧光手段发现了CdSQDs对EcoRI的猝灭方式虽然都是静态猝灭,但从Ksv大小反映出的猝灭强度是明显不同的,结合常数Ka也同样如此。通过热力学参数发现CdS QDs-OH与EcoRI的作用力方式为氢键和范德华作用力,而CdS QDs-CH3与EcoRI的作用力方式为疏水力。FTIR光谱计算出复合物中EcoRI的β-折叠和转角含量增加,而其含量的增加主要由α-螺旋和无序结构含量的减少。
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