论文部分内容阅读
目的：急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)是危重患者最常见的临床问题之一,脓毒症一直是AKI的首要原因,脓毒症合并AKI患者的死亡率高达70%。因此,探讨脓毒症时肾脏的保护治疗有着重要的临床意义。黑皮质素4型受体(melanocortin4receptor, MC4R)在摄食、能量代谢、性功能、心血管功能等方面起着重要调节作用。有文献报道选择性激动MC4R可以激活胆碱能抗炎通路,显著抑制重症急性胰腺炎大鼠全身炎症进展,保护胰腺组织。当脓毒症合并AKI时,能否通过选择性激动MC4R,激活胆碱能抗炎通路对抗炎症反应,实现对脓毒症患者肾脏的保护作用尚未见报道。本课题采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP),建立脓毒症大鼠模型,观察脓毒症对肾脏的影响,探讨脓毒症AKI动物模型的制备。在脓毒症AKI大鼠模型的基础上,通过选择性激动MC4R进行干预,观察对肾脏的影响,阐述选择性激动MC4R对脓毒症大鼠AKI的保护作用和机制,为临床预防和治疗脓毒症合并AKI提供实验基础和理论依据。方法：采用CLP法制备脓毒症大鼠模型(1)实验大鼠随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),每组各18只。二组均在造模后设置6h、12h和24h三个时间点取材,检测大鼠心率(heart rate, HR)和平均动脉压(mean arterial blood perssuer, MABP);测定血清中肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a, TNF-a)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达水平及血清肌酐(creatine,CRE)和尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)水平；观察大鼠肾脏组织结构的改变；检测肾脏组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1protein, HMGB1) mRNA的表达水平和核因子-κB(nuclear factor-KB, NF-κB)的活化。(2)实验大鼠随机分假手术组(Sham组)、假手术+Ro27-3225治疗组(Sham+Ro27组)、盲肠结扎穿孔组(CLP组)和盲肠结扎穿孔+Ro27-3225治疗组(CLP+Ro27组)。每组各6只。四组均在造模后24h取材,检测大鼠HR和MABP;测定血清CRE和BUN水平；观察大鼠肾脏组织结构的改变；检测肾脏组织中HMGB1mRNA的表达水平和NF-κ3的活化。结果：(1)与同时间点Sham组比较,CLP组6h和12h大鼠HR和MABP明显升高(p<0.01),24h MABP降低(p<0.01)；CLP组6h和12h大鼠血清中TNF-a和IL-6表达水平明显升高(p<0.01),24h降至Sham组水平(p>0.05)；CLP组6h、12h和24h大鼠血清中BUN水平升高(p<0.05和p<0.01),24h血清中CRE水平明显升高(p<0.01)；CLP组12h大鼠肾脏组织中HMGB1mRNA表达水平出现升高,24h明显升高(p<0.01)；CLP组6h大鼠肾脏组织NF-kB p65核阳性率升高,且随病程延长,NF-kB p65核阳性率明显升高(p<0.01)。Sham组各组大鼠肾小体形态正常,肾小管上皮细胞未见肿胀；CLP组各组大鼠肾小体中血管球淤血、皱缩,肾小囊腔扩大,且随病程延长,淤血、皱缩的血管球增多,并伴有肾小管上皮细胞肿胀。(2)Sham+Ro27组大鼠HR和MABP较Sham组明显降低(p<0.01),CLP组大鼠MABP低于Sham组(p<0.01),CLP+Ro27组大鼠MABP较CLP组升高(p<0.01)；CLP组大鼠血清BUN和CRE水平较Sham组明显升高(p<0.01),CLP+Ro27组大鼠血清BUN和CRE水平较CLP组明湿降低(p<0.01)；CLP组大鼠肾脏组织中HMGB1mRNA的表达水平较Sham组明显升高(p<0.01)；CLP+Ro27组大鼠肾脏组织中HMGB1mRNA的表达水平较CLP组降低(p<0.01)；CLP组大鼠肾脏组织NF-kB p65核阳性率较Sham组升高；CLP+Ro27组大鼠肾脏组织中NF-kB p65核阳性率较CLP组降低(p<0.01)；Sham组和Sham+Ro27组大鼠肾小体形态正常,肾小管上皮细胞未见肿胀,CLP组大鼠肾小体中血管球淤血、皱缩,肾小囊腔扩大,伴有肾小管上皮细胞肿胀,CLP+Ro27组大鼠也可见肾小体中血管球淤血、皱缩和肾小囊腔扩大,但数量明显少于CLP组,间质充血、水肿及炎性细胞浸润也有所改善。结论：采用CLP方法能成功的复制出脓毒症AKI大鼠模型,引起大鼠肾脏结构和功能的改变,引起肾脏组织中HMGB1mRNA的表达水平升高和NF-kB p65核阳性率增加；选择性激动MC4R对脓毒症AKI大鼠肾脏的结构和功能都有保护作用,并且抑制肾脏组织中HMGB1mRNA的表达水平升高和NF-κB p65核阳性率增加。