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目的:探索行之有效的组织工程韧带(tissue-engineered ligament,TEL)构建方法。方法:(1)构建携带人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)报告基因的重组腺病毒载体Ad.bFGF-eGFP,并进行鉴定、扩增。(2)分离、培养兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),利用Ad.bFGF-eGFP转染兔BMSCs,观察BMSCs表达、分泌bFGF的情况,及bFGF对BMSCs增殖、分化及产生韧带特异性细胞外基质的影响。(3)采用0.01%胰蛋白酶+1%DCA+核酸酶法及TBP法对兔髌韧带行去细胞处理,并进行组织学及生物力学检测,探索最佳的韧带去细胞方法,构建去细胞彻底、胶原结构保持完整、力学性能良好的去细胞韧带支架。(4)将转染Ad.bFGF-eGFP的BMSCs种植于去细胞韧带支架上,体外构建组织工程韧带,观察种子细胞在支架上的生长、增殖情况。结果: (1)成功构建Ad.bFGF-eGFP,其中含有eGFP报告基因;(2) Ad.bFGF-eGFP转染BMSCs后,bFGF蛋白大量表达、分泌,且显著促进BMSCs增殖并向成纤维细胞表型分化及加强韧带特异性细胞外基质的产生;(3)利用0.01%胰蛋白酶+1%DCA+核酸酶方法可完全去除韧带细胞成分,所得去细胞韧带支架力学性能良好、胶原结构保持完整,优于TBP法;(4)转基因BMSCs在去细胞韧带支架上生长良好,增殖显著高于对照组。结论:(1)经转染Ad.bFGF-eGFP改造的BMSCs增殖、向成纤维细胞表型分化及产生韧带特异性细胞外基质的能力显著增强,符合构建TEL种子细胞的要求;(2) 0.01%胰蛋白酶+1%DCA+核酸酶法对韧带作去细胞处理,可构建去细胞彻底、胶原结构保持完整、力学性能良好的TEL支架;(3)利用转基因BMSCs与去细胞韧带支架体外构建TEL可行。