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多西他赛是一种半合成紫杉类化合物,是一类新型的细胞毒性药物,对分裂期细胞有独特的作用,能够通过多种机制阻止细胞有丝分裂。多西他赛具有很强的抗肿瘤作用。由于多西他赛水溶性极差,现多用吐温80与13%乙醇制成注射液用于临床,但多出现过敏反应、体液潴留等严重的毒性反应。这些毒性反应的出现很大部分是由制剂中的吐温80导致的。为此,研究新型高效低毒的多西他赛新剂型成为近年药剂学研究的热点。脂质体是一种新型药物载体,可分别将水溶性或脂溶性的药物包封在脂质体的水层或脂膜内,被广泛用作抗癌药物载体。本文目的在于制备多西他赛脂质体(Docetaxel liposome, L-DOC),以期提高多西他赛的溶解性,改善体内药代动力学过程,避免吐温80等助溶剂导致的毒性反应,有利于增强抗肿瘤作用,为多西他赛脂质体临床前研究奠定基础。目的:1.研制包封率高、含药量高的L-DOC新剂型。2.建立L-DOC的质量控制方法,用于脂质体中多西他赛的含量测定。3.研究磷脂-胆固醇比例、脂质-药物比例、水化温度等影响因素,以优化L-DOC的处方和工艺。4.考察L-DOC冻干制剂在不同条件下的稳定性,为进一步研究贮存条件及其选择提供参考。5.对单次静脉给予L-DOC冻干制剂和市售多西他赛注射(Market docetaxel,M-DOC)后的大鼠体内药动参数进行研究。6.通过以上研究为下一步实验提供理论基础。方法:1.采用旋转蒸发法制备L-DOC,结合冷冻干燥技术获得包封率高、粒径均匀的冻干脂质体。2. HPLC检测脂质体中多西他赛的含量,采用超高速离心法测定脂质体的包封率。3.采用激光粒度仪测定L-DOC的粒径和多分散指数。4.通过单因素分析和均匀设计考察磷脂一胆固醇比例、脂质-药物比例、缓冲体系pH值、水化温度等几个重要因素,优化L-DOC的处方工艺。5.通过4℃留样观察和恒温加速实验,考察L-DOC的稳定性。6.血浆中多西他赛HPLC检测方法的建立及其血药浓度检测,用3P97药代动力学软件对数据进行统计分析。结果:1.优化前处方制备的L-DOC平均含量为标示含量的100.87%,平均包封率为92.40%,平均粒径约为214.9 nm。2.建立了HPLC测定脂质体中多西他赛含量的方法。该方法在3.64 ~ 7.80μg/ml浓度范围内线性良好,r=0.9996,回收率高达99.18%,日内RSD<2.0%,日间RSD<2.5%,方法稳定性好、重复性高。3.研究结果显示,磷脂/胆固醇4:1;药物/脂质1:50;药物/无水乙醇1:10;缓冲液pH值5为最优处方。脂质干膜在水化温度40℃条件下,水化60 min,然后进入MFIC反应腔,压力为35 KPa。优化处方制得的L-DOC含量为标示含量的(99.96±1.87)%,包封率(91.61±1.69)%,粒径(231.6±100.3) nm,PI (0.35±0.06)。4. L-DOC冻干制剂初步稳定性考察认为,将脂质体冻干制剂于4℃贮存,可以大大提高其稳定性,30 d内各考察指标无明显变化。5.大鼠体内药代动力学研究结果显示,L-DOC较M-DOC具有更高的血药浓度、更长的生物半衰期和更大的血药浓度一时间曲线下面积。结论:1.建立了稳定性好、重复性高,线性关系良好的HPLC分析方法。2.建立了超高速离心法测定多西他赛脂质体包封率的方法。3.建立了PCS分析脂质体粒径分布的方法。4.优化处方制备的L-DOC包封率、粒径、PI结果令人满意。5. L-DOC冻干制剂在低温条件下稳定性较好。6.药动学研究表明,与M-DOC比较,L-DOC冻干制剂T1/2更长,CL更小。