【摘 要】
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该实验以激烈热球菌的基因组为模板,通过 PCR 方法扩增到理想大小的 DNA 片段.分别将其与质粒 pET-21a(+)和pPIC9K 连接,将正确构建的重组质粒pET-Amy转化大肠杆菌BL-21细胞,
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该实验以激烈热球菌的基因组为模板,通过 PCR 方法扩增到理想大小的 DNA 片段.分别将其与质粒 pET-21a(+)和pPIC9K 连接,将正确构建的重组质粒pET-Amy转化大肠杆菌BL-21细胞,在IPTG诱导下,该基因在大肠杆菌中得到了表达,SDS-PAGE 分析表达产生的蛋白大约为 52kD,表达产生的α-淀粉酶其最适反应温度为85℃,最适反应pH值为5.5.将构建的重组质料pPIC9K-Amy 进行了序列测定,测序结果表明,克隆到的基因片段(不含信号肽编码区)为1305bp.将正确构建的重组质粒转化毕赤酵母GS115细胞,该基因在酵母细胞中也得到了表达.
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