桦褐孔菌三萜提取分离、结构鉴定及生物活性研究

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桦褐孔菌(Inonotus obliquus)是一种珍贵的药用真菌,属于多孔菌科,褐卧孔菌属,分布于我国东北地区、芬兰、波兰、俄罗斯及日本等地。桦褐孔菌在民间常用来治疗肝癌、子宫癌、胃癌、高血压和糖尿病等疾病。三萜是桦褐孔菌中非常重要的一类化学成分,具有非常重要的生物活性。本文以桦褐孔菌为对象,研究了桦褐孔菌三萜的提取、分离纯化工艺和体外生物活性,以期为桦褐孔菌三萜的研究应用提供理论依据。主要研究结果如下:1.响应面法优化超声辅助提取桦褐孔菌三萜的工艺条件。在以乙醇浓度、液料比、超声功率和超声时间为单因素试验的基础上,用响应面设计对液料比、超声功率和超声时间三个因素进行了优化,最终确定最佳提取工艺:液料比30:1(mL:g),超声功率380 W,超声时间32 min。在此条件下桦褐孔菌三萜的实际提取率为3.78%。2.优化了大孔树脂富集桦褐孔菌三萜的条件。先通过静态吸附和静态解吸实验,确定了AB-8型为适合富集桦褐孔菌三萜的树脂。然后通过动态吸附实验和动态解吸实验,得出最佳工艺参数:上样液浓度为1.5 mg/mL、上样体积1.5倍柱体积、上样流速1.5 mL/min、上样pH为自然条件下乙醇的pH值、洗脱液为95%乙醇,洗脱液体积为5倍柱体积。在此条件下,桦褐孔菌三萜纯度达69.96%。3.使用硅胶柱层析和半制备高效液相色谱对桦褐孔菌粗三萜进行分离纯化,得到两种三萜化合物。经薄层色谱、高效液相色谱检测,其纯度分别达到95.99%、97.27%。通过UV、IR、EI-MS、 1H NMR等波谱数据分析及查阅相关文献,推断该两种化合物其结构分别为Lup-20(29)-ene-3p,28-diol,白桦脂醇(betulin), lanosta-8,24-dien-3β-ol,羊毛甾醇(lanosterol)。4.用AB-8大孔树脂富集的桦褐孔菌粗三萜及分离出来的两种单体三萜进行了体外抗氧化实验、抑制A549肺癌细胞和对α-糖苷酶抑制作用的研究。实验结果表明,在实验范围内,还原力与粗三萜的浓度呈线性关系,对清除率DPPH、ABTS、羟基自由基的EC5o分别为0.39、0.61、0.51 mg/mL。粗三萜抑制A549肺癌细胞的效果随着三萜浓度的增加而增加,半抑制浓度IC50为167 μg/mL。两个单体三萜化合物对α-糖苷酶也有较好的抑制作用,化合物1和化合物2对α-糖苷酶的半抑制浓度分别为150 μg/mL、163μg/mL。
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