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背景:溶瘤病毒综合了免疫治疗、生物治疗和基因治疗的优点,成为近年来胶质瘤治疗研究的焦点所在。一些研究证实了溶瘤病毒,特别是能够自我复制的溶瘤病毒对治疗肿瘤的有效性。自我复制的溶瘤病毒的治疗原理是:将抗肿瘤基因重组到可自我复制的病毒载体上,用以转染肿瘤细胞。肿瘤细胞由此表达抗肿瘤基因,产生对肿瘤的抑制甚至杀灭作用。但是,溶瘤病毒的特异性不高时,很容易诱发机体的不良反应。如何使溶瘤病毒特异性有效性地针对肿瘤细胞,同时避免对正常细胞的损害,成为溶瘤病毒能否有效的肿瘤治疗方案的关键所在。为了获得专门治疗胶质瘤的溶瘤腺病毒,我们通过给腺病毒载体加载两个启动子,使病毒在肿瘤细胞中能自我复制和产生P53蛋白抗肿瘤。使用这两个启动子,使溶瘤腺病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-P53具有了针对胶质瘤细胞的特异性,大大提高了治疗的安全性。随后的体内外实验进一步验证了Ad-Tp-E1A-EnGp-P53治疗胶质瘤的有效性和特异性。目的:合成启动子hTERTp和杂合启动子GFAP,组装特异性的溶瘤病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-P53治疗胶质瘤,并通过体内外实验验证其有效性和特殊性。方法:通过质粒构建和基因重组技术,成功构建了条件复制溶瘤腺病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53。为了检测病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53的特异性和有效性,以重组病毒Ad-CMV-EGFP作为对照,通过实验测定Ad-Tp-E1A-EnGp-p53在U251细胞中的作用;用TCID50和MTT实验,检测Ad-Tp-E1A-EnGp-p53对U251细胞的增长抑制;检测了病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53干预后U251中P53蛋白的表达水平;检测了病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53干预U251细胞后其凋亡因子Caspase-3的表达情况;建立了裸鼠U251模型,采用Ad-Tp-E1A-EnGp-p53干预肿瘤在裸鼠体内生长;并做了活体裸鼠的PET CT检测,了解病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53对肿瘤生长、18F-FDG摄取和SUV值的影响。裸鼠处死后,监测病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53对肿瘤中原癌因子CREB的表达的影响。结果:（1）本实验成功构建了自我复制的溶瘤病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53;病毒能特异性抑制胶质瘤细胞的生长,而对正常细胞无影响。（2）该病毒能在U251细胞中表达产生P53蛋白。Western blot实验显示病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53提高了U251细胞中的P53蛋白含量（p<0.05）,并与病毒的滴度有量效关系。（3）病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53干预U251细胞,可增加细胞中Caspase-3及Cleaved-Caspase-3的表达（p<0.05）。（4）在裸鼠U251皮下胶质瘤模型中,病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53表现出良好的肿瘤生长抑制效果,使原癌基因CREB表达下降（p<0.05）;裸鼠活体PET-CT成像结果显示Ad-Tp-E1A-EnGp-p53干预组的裸鼠肿瘤区域缩小,18F-FDG摄取明显减少,较空白组和对照组低,有统计学意义（p<0.05）。结论:本实验首次将hTERTp启动子与GFAP杂合启动子共同组装到病毒Ad-Tp-E1A-EnGp-p53中,获得了一种新型溶瘤腺病毒。在体内、外实验中,Ad-Tp-E1A-EnGp-p53对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用,并且安全有效。这为未来临床上脑胶质瘤的综合治疗提供了一个新的选择。