论文部分内容阅读
黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）隶属于鲇形目鳞科黄颡鱼属，是我国常见淡水经济鱼类，具有含肉率高、肉质细嫩、味道鲜美、营养价值高等优点，深受韩国、日本等东南亚国家消费者青睐，养殖规模在我国不断扩大。硒是动物的必需微量元素，在调节甲状腺素活性，机体产热、生长;还原催化过氧化氧和有机过氧化物保护细胞免受氧化损伤以及调控细胞增殖、细胞死亡、免疫应答等多种生理功能中起重要作用。然而目前关于硒在黄颡鱼中的研究未见报道。本论文从以下四部分开展了黄颡鱼幼鱼硒的营养生理及抗氧化应激调控研究，得到如下结果: 1.硒对黄颡鱼幼鱼生长、脂肪沉积以及抗氧化能力的作用 实验选用初始体重2.12±0.01 g的黄颡鱼幼鱼为研究对象，随机分为6组，每组设置3个重复，分别投喂基础饲料中添加硒至＜0.05（对照组）、0.15、0.23、0.35、0.47和0.96 mg/kg的实验饲料，养殖8周。结果显示:投喂硒含量为0.23 mg/kg饲料组黄颡鱼幼鱼的增重率最高，显著高于对照组。随着饲料硒含量的增加，黄颡鱼幼鱼体脂肪含量升高，水分含量降低，对照组黄颡鱼幼鱼体脂肪含量显著低于其它组，而水分含量显著高于其它组。对照组黄颡鱼幼鱼血清胆固醇含量最高，显著高于投喂硒含量为0.23 mg/kg的饲料组，而肝脏LPL和FAS mRNA的相对表达量显著低于投喂硒含量为0.23 mg/kg的饲料组。饲料硒含量显著提高了黄颡鱼幼鱼体内硒的沉积以及肝脏GPx的活性，二者与饲料硒含量呈正效应关系。肝脏SOD的活性随着饲料硒含量先升高再降低又升高。以增重率为评价指标，通过非线性回归分析，计算出黄颡鱼幼鱼饲料中硒的适宜添加量为0.20 mg/kg，饲料中添加适量的硒能够提高LPL和FAS mRNA的表达量，降低血清胆固醇含量，提高鱼体脂肪含量和抗氧化能力。 2.缺硒和高硒对黄颡鱼幼鱼血细胞凋亡及肝脏HSP70基因表达的调控机制实验选用初始体重2.12±0.01 g的黄颡鱼幼鱼为研究对象，随机分为3组，每组设置3个重复，分别投喂基础饲料中添加硒至＜0.05 mg/kg（缺硒组）、0.23 mg/kg（正常加硒组）和6.5 mg/kg（高硒组）的实验饲料，养殖8周。结果显示:缺硒和高硒引起黄颡鱼幼鱼血细胞ROS含量和凋亡率的显著增加，而钙离子含量只在高硒组出现显著增加，NO含量各组间无显著差异。HSP70 mRNA表达量在高硒组显著升高。综上所述，饲料缺硒和高硒对黄颡鱼幼鱼造成氧化应激，ROS信号分子在缺硒和高硒诱导的细胞凋亡中起重要的作用，而钙离子可能由硒诱导产生，只在高硒诱导的细胞凋亡中起作用，NO信号分子不参与细胞凋亡的发生。此外，HSP70通过mRNA表达量上调降低高硒产生的氧化应激。 3.亚硒酸钠和酵母硒对黄颡鱼幼鱼生长、硒沉积以及抗氧化能力的影响实验选用初始体重2.12±0.01 g的黄颡鱼幼鱼为研究对象，随机分为4组，每组设置3个重复，分别投喂基础饲料中添加亚硒酸钠(Na2SeO3)和酵母硒(Se-Y)的0.028 mg/kg（对照组）、0.25 mg/kg（亚硒酸钠，Na2SeO3）、0.30 mg/kg（酵母硒，Se-Y1）和0.52 mg/kg（酵母硒，Se-Y2）的实验饲料，养殖8周。结果显示:0.30 mg/kg酵母硒组幼鱼的生长性能、鱼体和肌肉硒含量、GPx和SOD活性高于0.25 mg/kg亚硒酸钠组且高于对照组。酵母硒提高了肠道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力，但组间差异不显著。综上所述，饲料中添加0.30 mg/kg酵母硒比添加0.25 mg/kg亚硒酸钠能够提高黄颡鱼幼鱼的增重率、显著提高黄颡鱼幼鱼鱼体和肌肉硒的沉积以及肝脏GPx和SOD活性，0.30 mg/kg酵母硒在黄颡鱼幼鱼饲料中的生物效率最高。 4.亚硒酸钠和酵母硒对低温应激下黄颡鱼幼鱼血清生化指标及肝脏HSP70和脂肪代谢基因表达的影响 对上述投喂亚硒酸钠和酵母硒饲料8周后的黄颡鱼幼鱼（10 g左右）进行22℃-13℃慢性低温应激实验，结果显示:22℃时，亚硒酸钠和酵母硒对血清总蛋白、胆固醇、甘油三酯、尿素氮含量、HSP70基因表达量无显著影响，但0.30 mg/kg酵母硒组血糖含量显著高于亚硒酸钠组。13℃时，甘油三酯含量出现上升，血糖和尿素氮含量以及LPL和FAS mRNA的表达量出现下降;0.30 mg/kg酵母硒组血糖含量显著高于亚硒酸钠组,而尿素氮含量显著低于亚硒酸钠组;0.30 mg/kg酵母硒组黄颡鱼幼鱼肝脏HSP70 mRNA表达量显著低于对照组。综上所述，低温应激下，黄颡鱼幼鱼可能首先利用血糖作为能量来源，其次通过降低LPL和FASmRNA的表达动员甘油三酯作为能量储备。与0.25 mg/kg亚硒酸钠相比0.30mg/kg酵母硒使黄颡鱼幼鱼血糖保持在较高的水平，增加抗低温应激的能力并利于应激后的恢复。 本研究确定了硒在黄颡鱼幼鱼中的适宜添加量，初步揭示了硒对黄颡鱼脂肪代谢以及细胞凋亡的调控作用，比较了不同硒源的生物效率以及抗低温应激能力，该研究丰富了硒与黄颡鱼幼鱼之间的生物学基础理论，为指导硒在黄颡鱼中的合理利用以及配合饲料的研发和应用提供新的思路及技术支持。