本文对常见致病性军团菌的gyrB基因（DNA gyrase subunitβ encoding gene，简称gyrB）进行了测序和分析，并利用gyrB基因中的保守区和高变区进行菌种鉴定，建立了针对常见的4种军团菌快速、准确检测的多重PCR方法。本文还基于gyrB和16S-23S rRNA基因间区(16S-23S rRNA internal transcribed spacer，简称ITS)设计和筛选了种特异性探针，研制了水体中重要致病菌的检测基因芯片，实现了水体中11种重要致病菌的基因芯片检测。 I军团菌是引起军团病(Legionnaires disease，LD)和庞蒂亚克热(Pontiac fever)的主要病原菌，目前，世界多个国家和地区均有病例报道。我国自1982年首次从一例肺炎患者肺部分离出嗜肺军团菌以来，各地时有局部暴发及散发病例的出现。军团病易暴发或流行，病死率可高达15％～20%，但由于军团菌病缺乏典型的临床表现，与其他病原体引起的肺炎很难鉴别，因此采用特异、敏感、快速的检测方法就显得非常重要。然而现有的检测方法，细菌培养、血清学检测、抗原检测和分子生物学检测，要么检测种类较少，一些常见的致病菌无法准确检测，要么容易造成菌种之间区分不开，常常出现误判、漏判，且现有检测手段时间长、操作步骤繁琐，费时费力。因此我们破译并分析了军团菌的gyrB基因序列，探讨其可否应用于军团菌的快速、准确检测。　　 本研究完成了33株军团菌的gyrB基因序列破译，分析发现L.pneumophilasubsp.pneumophila亚种内gyrB基因的序列相似性为0.98～1.00，L.pneumophilasubsp.fraseri亚种内gyrB基因的序列相似性为0.99～1.00，然而，嗜肺军团菌种内的序列相似性却仅有0.91～1.00，分析发现相似性较低的原因是L.pneumophila subsp, pneumophila和L.pneumophila subsp, fraseri的gyrB基因序列存在着较多的突变位点，导致了嗜肺军团菌种内较低的序列保守性。嗜肺军团菌的这一特性，一方面为亚种的检测提供了可能，另一方面使嗜肺军团菌的检测面临了一定的困难（较低的种内保守性），然而，通过25株嗜肺军团菌gyrB基因序列的比对，我们发现，虽然两个亚种间存在着较多的突变位点，但整个基因内部仍有7处高度保守的区域，并且与其他军团菌在序列上存在着较大的差异，利用这些种内高度保守、种间特异的区域，我们设计了针对嗜肺军团菌的种特异性引物，并成功应用于环境水样的嗜肺军团菌PCR检测。　　 同时，利用破译的gyrB序列，我们还分别设计了博兹曼军团菌、长滩军团菌和米克戴德军团菌的种特异性引物，经过58株标准菌株和临床分离株的筛选验证，分别得到了上述3种菌的种特异性引物各l对，并成功建立了针对嗜肺军团菌、了博兹曼军团菌、长滩军团菌和米克戴德军团菌的多重PCR方法。使用该方法对63例空调冷凝水水样检测，检测结果与16S rRNA测序结果一致，说明该方法具有很高的实用性，可用于质检、临床等部门对常见军团菌的检测。Ⅱ　　 水是生命得以存在的必要条件，它使我们人类得以繁衍生息，人类的生活、生产、娱乐都离不开水。它同时也是许多病原微生物滋生、传播的场所和载体，这些病原微生物一旦进入人体则将可能使人患病、甚至导致死亡，严重威胁着人类健康。随着社会的发展和生活水平的提高，人们越来越关心自身的健康问题，而各种水体（包括生活饮用水，江河湖泊，游泳场馆等）的安全问题也日益成为人们关注的热点。因此，为了保护人们的身体健康，对各种水体尤其是饮用水中病原微生物的检测是十分必要和亟需的。　　 本研究针对水体中常见的11种致病菌亲水气单胞菌，肺炎克雷伯氏菌，嗜肺军团菌，铜绿假单胞菌，沙门氏菌，志贺氏菌，金黄色葡糖球菌，霍乱弧菌，副溶血弧菌，小肠结肠炎耶尔森氏菌以及问号状钩端螺旋体，基于gyrB基因和ITS序列，设计了26条种特异性探针，并用218株标准菌株和临床分离株对所设计的探针进行了筛选，最终建立了特异检测上述11种致病菌的基因芯片。该．方法，基因组DNA水平上的灵敏度为0.1ng，而当用纯菌进行芯片检测时，可检测到103CFU/mL，具有较高的灵敏度。用我们建立的芯片检测方法对30瓶矿泉水和12例空调冷凝水进行了检测，并与生化鉴定和16S rRNA测序结果比较，结果显示，芯片检测结果完全正确。总之，该方法比传统的检测方法检测时间短、灵敏度高、特异性高，并可实现对多种菌的同时检测，可应用于水质监测、流行病调查等领域。