【摘 要】
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本课题主要研究了野油菜黄单胞菌HHL-3的感受态细胞的制备、带有抗药性质粒的转化、菌种基因组DNA提取方法的建立和酶切及产胶基因XanA片段的PCR扩增。提出了制备感受态细胞
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本课题主要研究了野油菜黄单胞菌HHL-3的感受态细胞的制备、带有抗药性质粒的转化、菌种基因组DNA提取方法的建立和酶切及产胶基因XanA片段的PCR扩增。提出了制备感受态细胞的标准方案，采用此方案获得了转化率为2×106-4×107cfu/ugDNA的野油菜黄单胞菌感受态细胞。用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构，使胞内核酸释放，用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质，异丙醇沉淀DNA，TE溶解DNA。采用此SDS和CTAB结合的方法提取的DNA琼脂糖电泳图谱与试剂盒UNIQ-10提取的基因组DNA及D-5010A试剂盒法提取的基因组DNA图谱相同，DNA经紫外分光光度计检测OD260/OD280在1.80-1.90之间。DNA能被EcoRI、XbalI酶切消化。根据从互联网上的基因数据库中查阅获得XanA基因的核苷酸序列来设计相应的引物，以黄原胶菌株基因组DNA为模板，通过对PCR条件的优化实验从而扩增得到XanA基因。进行野油菜黄单胞菌XanA产胶基因PCR扩增程序的优化结果显示各个反应体系的最佳添加量为：cDNA模板浓度为3μl、Mg2+浓度为3μl、引物数量2μl、循环次数设定为35、退火温度为55℃。结果表明引物对XanA表现出很强的特异性，基因条带的大小约为1.5Kb，和基因文库的XanA基因大小基本保持一致。
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