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猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）等相关疾病的主要病原。给世界养猪业造成巨大的经济损失。了解PCV2的流行情况，可以给PCV2的预防和控制提供指导。猪圆环病毒ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白Cap蛋白，该蛋白具有良好免疫原性。PCV1和PCV2 ORF2基因序列的核苷酸同源性仅为67％，两种血清型的Cap蛋白虽存在共同的抗原决定簇，但两者没有抗原交叉性，因而是区分PCV1和PCV2的重要蛋白。根据猪圆环病毒2型（PCV2）LC株序列，设计合成5对引物，采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同长短ORF2基因片段，分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上，经酶切、序列测序正确后，再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中，用终浓度1mmol／L IPTG诱导，表达产物以包涵体的形式存在。经Western-Blot检测表明，表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别，具有良好的抗原性。用含有2mol／L、4 mol／L和8 mol／L尿素的包涵体洗涤液多次洗涤溶解包涵体后，用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，获得了理想的纯化效果。利用表达的重组融合蛋白ORF2c作为抗原，建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法，并对ELISA的反应条件进行了摸索，确定了最适工作条件。结果表明，重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.24μg／ml，最适包被条件为4℃过夜加37℃2h，待检血清的稀释度为1：40，HRP-兔抗猪IgG的工作浓度为1：4000，待检血清和酶标二抗的反应条件和反应时间均为37℃30min，底物室温显色15min，阴阳性临界值为0.39。用建立的间接ELISA方法检测了160份临床血清样品，并与市售的ELISA诊断试剂盒的检测结果相比较，敏感性和特异性分别为90.4％和97.2％，总符合率达95％。两种检测方法的结果之间差异不显著（P＞0.05）。试验表明，建立的间接ELISA检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于PCV2血清抗体的检测。