【摘 要】
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根据α-天冬氨酰二肽酶基因(pepE)的碱基序列,作者设计并合成了两条寡核苷酸引物,利用PCR技术,以pjG29质粒为模板,扩增了α-天冬氨酰二肽酶基因,得到大小为720bp的DNA片段,经
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根据α-天冬氨酰二肽酶基因(pepE)的碱基序列,作者设计并合成了两条寡核苷酸引物,利用PCR技术,以pjG29质粒为模板,扩增了α-天冬氨酰二肽酶基因,得到大小为720bp的DNA片段,经酶切后与载体pBV220连接,构建了高表达重组质粒pBVPE(4348bp).转化大肠杆菌后,获得了满意的工程菌,经升温诱导表达目的基因,得到两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白和包涵体蛋白,共占细菌总蛋白的50.3%.对于包涵体,作者建立了一种不同于以往的萃取方法,利用温和的处理条件(低浓度温和表面活性剂、碱性条件、低离子强度、40℃和短的处理时间),回收了包涵体中95%以上的表达蛋白.此外,根据多种已知信号肽氨基酸残基序列的特点,设计了经优化的非天然信号肽,通过信号肽的导向作用实现了α-天冬氨酰二肽酶的分泌表达,在培养基上清中,目的蛋白的分泌量可达胞处可溶性蛋白的63.8%.
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