【摘 要】
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该文以牛泡沫病毒BFV3026中国毒株为材料,探索其转录调节的分子机理,特别是Tas与TRE相互作用的特点及方式.该文的工作内容包括以下3部分:(1)通过ExoⅢ/S1核酸酶外切法构建BFV
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该文以牛泡沫病毒BFV3026中国毒株为材料,探索其转录调节的分子机理,特别是Tas与TRE相互作用的特点及方式.该文的工作内容包括以下3部分:(1)通过ExoⅢ/S1核酸酶外切法构建BFV LTR系列缺失报道质粒,并以PCR方法构建BFV IP缺失质粒,将报道质粒与Borf-1真核表达质粒共转染BL-12细胞,检测luc报道基因的瞬时表达水平以精细划分TRE的范围;(2)在E.coli中表达野生型及缺失型Borf-1重组蛋白,纯化后测定其活性;(3)体外扩增TRE序列,末端标记后作为探针与Borf-1重组蛋白反应,通过电泳迁移率变动分析和DNaseI足迹实验研究Tas与TRE的作用方式并寻找结合位点,同时比较Tas蛋白不同区段在调节中所起的作用.
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