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本研究通过系列试验,对绵羊精液冷冻优化程序和稀释液优化配方两个方面进行了探索,结果表明:
1、无角道塞特、萨福克、夏洛莱、特克塞尔四个品种种公羊的采精量、精子密度、鲜精活率、畸形率和顶体完整率之间存在着种间差异。
2、以冷冻一解冻精子活率、畸形率、顶体完整率、生存指数为评价指标,通过正交实验建立如下精液冷冻优化程序:精液与稀释液的稀释比例为1:3,采用两步稀释法进行稀释,在4℃下平衡2.5h,用程序冷冻仪进行冷冻,降温时间为8min,冷冻后在55℃恒温水浴箱内解冻8s。
正交实验发现,不同的平衡时间对精子冷冻-解冻后活率、畸形率、顶体完整率以及生存指数都有显著影响(P<0.05)。平衡2.5h精子解冻后活率、畸形率、顶体完整率以及生存指数都明显高于平衡1h与平衡5h(P<0.05)。降温速度对精液冷冻-解冻后活率有显著影响,降温8min精子解冻后活率、畸形率、顶体完整率以及生存指数都明显高于降温4min与降温12min(P<0.05)。三个解冻温度中精子活率最高的是75℃4s解冻,但是75℃4s解冻后精子的生存指数却为最低,35℃12s解冻精子的生存指数均显著高于75℃4s和55℃8s解冻(P<0.05),综合考虑活率和生存指数两个因素,选定55℃8s为最适解冻温度。
3、甘油与乙二醇对精子冷冻-解冻后活率和顶体完整率之间的差异不显著(p>0.05),在精子活率方面本试验并未发现乙二醇优于甘油,但使用乙二醇做抗冻保护剂冷冻精液,解冻后精子的顶体完整率高于用甘油作为抗冻保护剂冷冻-解冻后精子的顶体完整率。这说明了乙二醇在开发绵羊精液冷冻过程中具有应用价值。
4、三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸-糖-卵黄稀释液与柠檬酸钠-糖-卵黄稀释液对精液冷冻效果之间的差异不显著(P>0.05),但是三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸-糖-卵黄稀释液冷冻绵羊精液解冻后活力与顶体完整率都要高于柠檬酸钠-糖-卵黄稀释液。