【摘 要】
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月季黑斑病是由蔷薇放线孢菌引起的一种毁灭性病害.虽然不同月季品种对其敏感性不同,但尚无月季品种对黑斑病免疫,而几丁质酶基因在月季中的表达能在一定程度上增加其抗真菌
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月季黑斑病是由蔷薇放线孢菌引起的一种毁灭性病害.虽然不同月季品种对其敏感性不同,但尚无月季品种对黑斑病免疫,而几丁质酶基因在月季中的表达能在一定程度上增加其抗真菌能力.该试验研究了月季再生体系的建立和几丁质酶基因中间表达载体的构建,为转基因打下基础.该研究采用了10个切花月季品种,重点以Pepita、Red Champ为试验材料,建立了月季外植体生长、扩繁、生根的基本培养程序;初步探索了以叶片为外植体的愈伤组织诱导、分化的激素组合和培养条件.试验证明,适于月季增殖的培养基是MS+BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L,合适的生根培养基是1/2MS+NAA0.5mg/L;不定芽再生为:MS+BA0.2mg/L+2,4-D2.0mg/L中诱导愈伤组织,然后转移到MS+BA6.0mg/L+NAA0.05mg/L+GA<,3>0.1mg/L中分化不定芽.2,4-D对不定芽再生有关键性作用,ZT在不定芽的分化方面也有一定的促进作用.在抗生素浓度梯度试验中,50-100mg/L的卡那霉素比较适合做为阳性组织的筛选浓度.在基因构建中,该研究用PCR方法将目的基因片断(几丁质酶基因,chiB)准确扩增出来,通过酶切、连接、α互补检测、菌落PCR等分子生物学操作将之构建到植物双元载体pBI121中.目前中国在月季转基因方面的研究未见正式论文发表.该研究为月季转基因育种打下了基础,为进一步研究提供了参考.
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