【摘 要】
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该研究以草生欧文氏菌10025A为实验菌种(以下简称A25),主要做了以下几方面研究工作:(1)从多种INA细菌的培养基中筛选了最适合A25高水平表达冰核活性蛋白的培养基,即以收获菌
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该研究以草生欧文氏菌10025A为实验菌种(以下简称A25),主要做了以下几方面研究工作:(1)从多种INA细菌的培养基中筛选了最适合A25高水平表达冰核活性蛋白的培养基,即以收获菌体为目的的TYG和MPDA,以收获无细胞冰核为目的的L培养基,并确定了最佳培养条件;(2)采用基础培养基L研究不同C源和不同营养水平的无机磷对A25的生长和冰核活性蛋白表达的影响,结果发现在实验所选用的碳源中山梨醇为最佳碳源,培养基中无机磷的量为1mM最佳;(3)研究了菌体生长周期与冰核活性蛋白表达关系,结果表明菌体的冰核活性蛋白表达的数量和质量与菌体的生物量呈正相关的关系;(4)研究了菌体表达冰核活性蛋白的方式,发现A25能够向细胞外分泌无细胞冰核,L培养基中的MOPS能够增加细胞的通透性,明显增加了无细胞冰核的分泌量,丝裂霉素C能够促进A25冰核活性蛋白的合成和无细胞冰核的分泌;(5)采用超声波破碎、凝胶层析的方法分离纯化得到了INA细菌A25中的TypeI冰核活性蛋白,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法测定了该蛋白的分子量为150kDa左右,蛋白单体的分子量为38kDa左右,分析冰核活性蛋白至少要四聚体才会表达出高冰核活性.
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