水稻齿叶矮缩病毒Pns10的定位及其自身互研究

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水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)水稻病毒属(Oryzavirus)的典型成员。RRSV基因组由10条dsRNA组成(S1-S10),编码11种蛋白质(S4编码2种蛋白),其中包括8种结构蛋白和3个非结构蛋白(Pns6、Pns7和Pns10)。该病毒引起的水稻齿叶矮缩病在东南亚、东亚和南亚的一些国家局部地区发生,给当地的水稻生产带来很大的损失。   本文通过直接荧光观察和免疫荧光技术研究了RRSV Pns10及其缺失N端10个氨基酸的突变体Pns10ΔN和缺失C端10个氨基酸的突变体Pns10ΔC在昆虫细胞中的定位情况。结果发现,完整的Pns10及其N端和C端缺失突变体在Sf9细胞中都能形成类似于viroplasm基质的内含体。缺失N端10个氨基酸的突变体形成的内含体要比完整Pns10形成的内含体要大,在细胞中的分布比完整Pns10形成的内含体分布更为弥散。缺失C端10个氨基酸的缺失突变体形成的内含体在大小和数量上都与完整的完整Pns10形成的内含体没有明显差异。   通过酵母双杂交技术和免疫共沉淀技术对Pns10、Pns10ΔN和Pns10ΔC的自身互作进行了研究。结果表明Pns10能自身互作,Pns10ΔN和Pns10ΔC则不能自身互作,这说明Pns10具有自身互作的功能,并且该蛋白的N端10个氨基酸和C端10个氨基酸是Pns10的自身互作必需的。   通过实验得知RRSV Pns10定位在细胞质,具有自我互作的能力。已有报道表明Pns10还具有ATPase活性。因此Pns10很可能是组成病毒原质的成份,并在病毒的装配中起作用。
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