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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属,无囊膜单股环状DNA病毒,是迄今已知最小的动物病毒之一。根据PCV的抗原性和基因组成不同,将其分成两种不同的基因型即PCV1和PCV2。PCV1无致病性,但广泛存在于猪体内及部分猪源传代细胞系;PCV2具有致病性,可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post- weaning multisystemic wasting syndrom,PMWS)。PCV2基因组含有11个开放阅读框(ORF),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒的主要结构蛋白(Cap),具有病毒的主要的抗原中和表位。本研究在实验室前期研究的基础上,将冻存的重组腺病毒重新培养后,对其进行PCR、酶切、测序和Western-blot鉴定。然后将重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2和Ad-ORF1、Ad-ORF2混合毒以及空载体腺病毒Ad-C、PBS分别免疫6周龄Balb/c小鼠,在初次免疫后的第2周和第4周分别加强免疫一次。第三次免疫后两周每组分别取5只小鼠,眼球采血后处死。在无菌条件下,取脾脏分离淋巴细胞,测定脾细胞中Th、Tc和B细胞亚群的含量以及脾淋巴细胞的增殖能力、NK细胞的自然杀伤活性、CTL的特异性杀伤活性。同时测定各组小鼠血清的PCV2 ORF2特异性抗体。实验结果如下:1.将实验室前期构建的重组腺病毒重新培养后经PCR、酶切和测序鉴定,证实目的基因插入正确,无丢失和变异现象发生;荧光显微镜观察和Western-blot检测显示,重组腺病毒能稳定表达目的蛋白,而且目的蛋白能被PCV2感染猪的阳性血清所识别。2.重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2和Ad-ORF1、Ad-ORF2混合病毒经肌肉途径免疫Balb/c小鼠后,随着免疫次数的增加小鼠产生的针对PCV2 ORF2基因的特异性抗体水平不断升高,第3次免疫后2周达到最高,但第3次免疫后4周有所下降;与对照组相比,各实验组都能够引起小鼠脾细胞中Th、Tc亚群含量的增加,但B淋巴细胞的百分含量无明显变化,实验组间Th和Tc亚群的百分含量无显著差异(P﹥0.05);脾淋巴细胞增殖实验表明,试验组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力与对照组比较均有显著的差异,但实验组间脾淋巴细胞的增值能力无显著差别(P﹥0.05);NK细胞自然杀伤活性实验显示,试验组小鼠的NK细胞自然杀伤活性对照组比较均有显著的差异,Ad-ORF2组和Ad-ORF1 + Ad-ORF2组小鼠的NK细胞自然杀伤活性高于Ad-ORF1+2组(P﹤0.01),Ad-ORF2组和Ad-ORF1 + Ad-ORF2组小鼠的NK细胞自然杀伤活性差异不显著(P﹥0.05);CTL杀伤活性实验表明,试验组小鼠的CTL杀伤活性与对照组比较均有显著的差异,Ad-ORF1 + Ad-ORF2组小鼠的CTL杀伤活性最高,Ad-ORF2组小鼠的CTL杀伤活性(P﹤0.01)最低。本研究以Balb/c小鼠为实验动物模型,对重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2及Ad-ORF1 + Ad-ORF2混合毒的免疫效果进行了研究,结果表明,重组腺病毒均能在小鼠体内诱导较强的PCV2全面免疫应答反应,包括体液免疫应答反应和细胞免疫应答反应。这些实验结果不仅为进一步的猪体实验提供了参考,还为我国PCV2基因工程活载体疫苗的深入研究及应用提供了物质基础。