骨骼有两个明显的特征:一是广泛分布于躯体并且组成骨骼的元件形状形态具有独特性,二是骨骼由两种不同的组织(成骨和软骨)组成。骨骼的形成主要通过软骨内成骨(endochondral ossification)和膜内成骨(intramembranousossification)两种方式。脊椎动物骨骼的生成是一个复杂并高度有序的过程。作为转录生长因子runt/Cbfa家族的一个成员,Cbfa1(runx2)通过其runt结构域结合到DNA上激活成骨细胞中骨钙蛋白基因的表达。在成骨分化过程中,p204作为Cbfa1的辅助激活因子共同促进成骨细胞的分化。BMP2诱导间充质细胞C2C12向成骨细胞分化过程中,p204表达量增加;p204,Cbfa1和pRb蛋白组成三元复合体共同参与了成骨细胞分化的过程。　　 模式动物斑马鱼因其个体小、性成熟周期短、体外受精和发育、胚体透明容易观察、便于显微操作等优势,现已用于发育生物学相关研究,取得了许多进展。目前,虽然斑马鱼还没有广泛应用于骨发育和相关疾病的研究,但已有许多研究证明了其可行性。斑马鱼骨骼可以分头部骨骼、躯体骨骼和鳍三种,在骨骼生成与发育过程中有着从头到尾的有序骨化的过程,头部首先形成,接着躯干骨化,与躯干骨化的同时鳍逐渐形成。Manuel等认为斑马鱼的鳍质鳞条虽然不是一个典型的骨骼组织,但其再生过程对于骨组织功能紊乱的临床前研究具有重要的意义。　　 我们以斑马鱼为模式动物,采用显微注射的方式将外源p204和cbfa1导入其单细胞胚胎内,通过观察胚胎中融合蛋白GFP的荧光表达,发现两种融合质粒在斑马鱼胚胎中从8 hpf时期开始表达,表达位置主要集中在胚胎的胸腹部,头部和尾鳍处有较少表达。胚胎发育至8 dpf时,荧光表达量开始减少,约12 dpf后荧光彻底消失。两种质粒p204-EGFP和cbfa1-EGFP注射诱导斑马鱼幼鱼产生大量畸形,以腹部膨大、脊椎弯曲、心胸部变异、尾部弯曲变短、头部畸形等为主。这些较严重畸形幼鱼只有少部分可存活下去。　　 通过qPCR检测发现外源p204和cbfa1单独注射都可以诱导斑马鱼骨骼生成相关标志基因和关键基因osx,vent,tcf7表达量显著上调,而p204和cbfa1双质粒注射组相关基因的表达量高于任一单独注射组。进一步通过原位杂交检测osx,tct7在质粒注射后的时空表达,研究结果表明这两个基因表达时间提前,并且表达区域也有所扩展。同时,外源p204和cbfa1都可以诱导促进斑马鱼软骨,特别是pharyngeal arches软骨的分化,刺激成骨的形成,与相关成骨基因表达量高于单独注射组结果类似,在促进骨骼的生长和软骨的分化过程中,双质粒注射组结果也更加明显。研究表明:1.外源p204和cbfa1都可以参与斑马鱼骨骼生成分化过程中,并在一定程度上促进或更改(造成畸形发育)这一进程;2.p204可以促进cbfa1(或runx2b)作为骨骼生长中心因子参与骨骼生成,二者共同作用促进斑马鱼硬骨形成。本研究为进一步以斑马鱼为模式动物阐明以runx2b为中心的骨骼发生相关的分子机制提供了依据。