抗坏血酸-谷胱甘肽(ASA–GSH)循环作为植物体内主要抗氧化系统,是由三个相互依赖的氧化还原偶AA/DHA、GSH/GSSG和NADPH/NADP+组成,保证了活性氧有效清除并维持了细胞的动态平衡。GSH在植物胁迫响应中的作用在很大程度上依赖于其细胞内浓度、氧化还原状态、GSH与GSSG的比率并与相关代谢的酶类活性的提高、诱导密切相关。谷胱甘肽还原酶(GR)是一个黄素蛋白酶,利用NADPH作为电子供体催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)形成还原型谷胱甘肽(GSH),它是ASA-GSH循环中的一个关键酶,保护植物免受氧化胁迫,尤其在植物的光合器官中表现更是突出;谷胱甘肽转移酶(GST)是一类细胞质酶,也是一种多功能的解毒酶,促使谷胱甘肽结合反应的关键酶,催化谷胱甘肽和含亲电子基团的辅基形成谷胱甘肽衍生物,从而达到解毒的目的。本试验以‘皇家嘎拉’苹果叶片为试材,克隆了GR和GST基因cDNA片段并对其在不同发育阶段的叶片进行半定量RT-PCR表达分析,为进一步研究其代谢生理和分子机理,表达时空的特异性,以及GR和GST在ASA-GSH循环中的作用奠定基础。主要研究结果如下:1.用SDS-热酚法和试剂盒提取了‘皇家嘎拉’苹果叶片的总RNA,试验表明改进的SDS-热酚法可提出高质量的RNA,且成本低廉;试剂盒法提出的RNA虽然有DNA污染但经过DNA酶处理也可得到较高产率的RNA,能达到是试验的要求,而且提取时间较短,因此两种方法都可行。2.根据GeneBank中已经登录的几个编码植物GR和GST基因保守序列设计两对引物,运用RT-PCR扩增到两个中间片段,序列同源性分析表明苹果GR cDNA序列与豇豆、豌豆、拟南芥相似性分别为85%、82%、78%;GST cDNA序列与水稻、拟南芥、烟草的相似性分别为72%、60%、50%。3.半定量RT-PCR分析结果表明,GR在10d左右叶龄的表达量最大,在其余时间几乎不表达;GST在5d和10d都有较高的表达量,随生长时间的延长,其表达量减弱。