前言 分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A，SIgA)自然存在于唾液中，也可由特异性抗原刺激产生，可干预微生物对口腔表面的附着，改变细菌的表面状态，阻碍其在牙面的粘附和定居，还可抑制细菌合成多糖，从而减少变形链球菌(mutans streptococci，简称MS)致龋的机会和可能。唾液过氧化物酶(salivary peroxidase，简称Spx)，在过氧化氢存在的条件下，能催化硫氰酸根离子(SCN~-)发生氧化反应，中间产物均是强氧化剂，进入菌体后，能阻断糖代谢通路，从而抑制细菌增殖，因而也有一定的防龋作用，目前对于SIgA、Spx和龋病的关系的研究尚有争议，原因之一是实验方法的不准确性和不一致性，本实验应用先进、敏感的非竞争性生物素-抗生物素酶联免疫吸附法(non-competitive avidin-biotin immuno-enzymatic assay，简称NABA法)测定唾液中SIgA浓度，用Nb-SCN~-法测定唾液Spx浓度，并研究它们和龋病的关系。同时在国内首次对多龋组、无龋组儿童唾液中SIgA、Spx的相关关系进行了研究，为唾液抗菌蛋白和龋病关系的研究提供了新线索。 实验方法 随机选取1个幼儿园中4-5岁多龋儿童20名(dmft≥5)及无龋儿童20名。采样均在上午9-10时，由同一检查者完成。用吐唾法取非刺激性全唾液2ml，同时记录dmft。取1ml样本离心(18，000g，15min，4℃)，上清液-20℃保存待测Spx。其余1ml唾液-20℃保存待测SIgA。 NABA法测定唾液SIgA浓度：向兔抗人 IgA（a链）包被的96IL酶标板中依次加人稀释唾液（标准品X生物素标记羊抗人 IgA…链X亲和素－辣根过氧化物酶、酶底物，最后以硫酸终止反映，405urn处读取 OD值，以 IgA浓度的对数为横坐标，以 OD值对数为纵坐标，绘制标准曲线，计算样本SIgA浓度。 Nb－SCN－法测定唾液 SpX浓度：混合物为 1．5 Inl NbS，1．3 rnl0．0092M KSCN，100gi标准品（唾液广向96孔酶标板的每孔中加入 200 pl混合物。加人过氧化氢溶液使反应开始。记录第 1分钟内405 urn处OD值的变化，按Mansson＿Rahem扣ua的公式： 活性＝AA／6t xl八 x反应混合物总体俐加人样本体积 来计算酶活性，以LP浓度为横坐标，酶活性为纵坐标，绘制标准曲线，计算样本SPX浓度。 实验结果 多龋组儿童唾液SIgA浓度为52．44 L 13．23pg／Inl，无龋组为乃．73。22．匕冲d，前者低于后者，二者有显著性差异（P＜0·of人多龋组儿童唾液SPX浓度为5．865 tZ，297pg／Inl，无龋组为7．om土3．228 p才M，二者无显著性差异（P＞0．05）。 无龋组儿童唾液SIgA／Px浓度呈显著正相关，相关系数r值为 0．72（P＜0．of），多龋组儿童唾液 SIgA＊px相关系数为口．38，无统计学意义汀＞o．05八 讨 论 早在60年代，Keyes就已论证，龋病是一种细菌感染性疾病，MS是人类的主要致龋菌，SIgA可通过干扰变链对牙面的粘着，或通过凝集细菌，使其便于从口腔中清除，以及抑制多糖合成，减少 ·2·菌斑量等作用来抑制龋病发生。对于SIgA和龋病的关系，国内外均作了大量研究，但结果很不一致。Benderli研究了26名肾移植病人唾液SIgA浓度和龋齿的关系，发现肾移植病人唾液SIgA浓度显著低于对照组，术后 12月病人的龋齿数明显增加；tehtonen发现多龋者唾液SIgA浓度高于低龋者；张志平测定了60名龋患者和 60名健康者唾液 SIgA含量，前者显著低于后者涨君平测定了 3－4岁 39名无龋儿童和 64名多龋儿童唾液中 SIgA浓度，未发现二者的差别。对于研究结果有差异的原因，Rudney认为首先是实验方法的不准确性和不一致性。目前常用于SIgA浓度测定的方法有单向免疫扩散法、免疫比浊法、放射免疫分析法及酶联免疫吸附法（enZym 一linked i。unosorbent ass印，ELISA法），前两者准确性差，人工测量误差大，而放射免疫分析需要较长时间，还有要求使用放射性同位素的缺点，普通ELISA法和NABA法相比也不够敏感。非竞争性生物素－抗生物素酶联免疫吸附实验hon－competitive avldln－blotin。uno－e啊m叨c ass盯s，简称 NABA法）是用生物素标记抗体取代普通ELISA法中的酶标抗体，由于生物素－亲和素之间的亲和常数高，每个抗体可结合10个左右生物素分子，而只能结合1个酶分子，因而具有更高的灵敏度；此外，由于抗体可高度稀释，减少了背景着色的可能性，使结果更准确。国外 NABA法已开始用于唾液 SIgA浓度的测定，而国内尚无有关报道。我们通过实验认为，NABA法操作简便快速，结果准确，是一种适用于检测唾液SIgA浓度的先迸方法。本研究应用先进敏感快速的 NABA法研究幼儿非刺激性全唾液 SIgA浓度和龋病的关系，结果显示多龋组儿童非刺激性全唾液SIgA浓度为52．44 Z13．23p矿Inl，无龋组为75．73。22．15pyrnl，前者显著低于后者，有统计学意义，与大多数学者的研究结果一致，认为唾液 SIgA对于预防龋齿发生有一定作用。 唾液SpX能催