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Hippo信号通路最初是在果蝇中发现的一条信号转导途径,通过协同调节细胞生长、细胞增殖和细胞凋亡来控制器官的大小。Hippo信号通路核心组分由两个磷酸激酶Hippo、Warts及两个接头蛋白Salvador、Mats组成,Hippo与Salvador结合形成Hippo-Salvador激酶复合物,该复合物磷酸化激活Warts-Mats复合物,随后活化的Warts磷酸化下调Yorkie的转录激活作用,使器官大小受到控制。RASSF是一类含有RA结构域的Ras效应因子,通过RA结构域与RAS家族蛋白相互作用。RASSF基因大多在体内扮演肿瘤抑制因子的作用,广泛参与了体内的生命活动,如细胞凋亡、细胞周期以及微管的稳定。dRASSF是果蝇中的RASSF基因,有文献曾报道dRASSF通过与Salvador竞争性结合Hippo来拮抗Hippo信号通路,抑制Hippo激酶活性,但这一结论还有待于进一步的深入研究证实,目前对dRASSF与Hippo信号通路关系的相关研究比较少。
本文利用免疫共沉淀方法,以果蝇S2细胞为研究对象,证明了在细胞内Hippo与dRASSF存在相互作用,而Salvador与dRASSF不发生相互作用,并且Hipoo和dRASSF的SARAH结构域介导了二者的结合。免疫荧光检测发现Hippo、Salvador分布于细胞质,而dRASSF主要分布于细胞核,Hippo介导dRASSF由细胞核转位至细胞质,使二者呈现明显的细胞质共定位。果蝇遗传学实验中利用dRASSF过表达、knock-down、knock-out果蝇分别检测对Hippo基因功能的影响,结果一致表明dRASSF对Hippo的活性起促进作用。不同结构域对于dRASSF发挥促进Hippo功能所起的作用效果不同,其中SARAH结构域是必须的,LIM结构域影响不很显著,RA结构域以及首次发现的NLS对dRASSF促进Hippo活性这一功能具有重要的意义,dRASSF突变掉RA或删除NLS后,使。Hippo基因的活性得到进一步激活。
综上,本文首次研究证明了dRASSF能够加强Hippo信号通路,对Hippo活性发挥促进作用,这一发现丰富了人们对dRASSF与Hippo信号通路关系的认识,对于阐明Hippo信号通路的激活分子机制具有重要意义。