【摘 要】
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目的:本研究在细胞实验中,过表达/沉默胰腺癌细胞中Ptn基因,达到PTN蛋白差异表达。观察PTN蛋白差异表达对背根神经节神经元(Dorsal Root Ganglion neurons,DRGn)增殖、凋亡影
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目的:本研究在细胞实验中,过表达/沉默胰腺癌细胞中Ptn基因,达到PTN蛋白差异表达。观察PTN蛋白差异表达对背根神经节神经元(Dorsal Root Ganglion neurons,DRGn)增殖、凋亡影响,及对DRGn轴突生长的影响。方法:查询基因库(NCBI)中Ptn的基因序列,构建过表达/沉默表达Ptn基因的质粒载体;用脂质体法将构建的过表达/沉默Ptn基因的质粒载体转染到培养的MIA PaCa-2胰腺癌细胞中,同时设计分组:空白对照组、空质粒组、实验组;之后采用qRT-PCR检测胰腺癌细胞中Ptn mRNA的表达,Western blot检测胰腺癌细胞中PTN蛋白的表达,用以验证过表达/沉默效果。提取不同分组中过表达/沉默表达的PTN蛋白,加入到培养的DRGn中,使用CCK-8法测定细胞增殖曲线,分析PTN蛋白差异表达对DRGn的细胞增殖、凋亡的影响;免疫荧光检测PTN蛋白差异表达对DRGn轴突生长的影响。结果:过表达/沉默胰腺癌细胞中Ptn基因,实验组中Ptn mRNA的表达较空白对照组明显升高/减少,差异具有统计学意义(p<0.01);实验组胰腺癌细胞中PTN蛋白的表达较空白对照组明显升高/减少,差异具有统计学意义(p<0.01);CCK-8法测定细胞增殖曲线,高表达/低表达的PTN蛋白对背根神经节神经元细胞增殖情况影响变化明显(p<0.01);通过免疫荧光观察显示实验组DRGn轴突的长度和复杂程度高于/低于对照组(p<0.05)。结论:1.Ptn基因的过表达,可以增加胰腺癌细胞中PTN蛋白的表达。2.沉默Ptn基因,可以减少胰腺癌细胞中PTN蛋白的表达。3.PTN蛋白高表达能促进DRGn增殖及轴突生长,增加轴突复杂性。4.PTN蛋白低表达可以减少DRGn增殖及轴突生长,降低轴突复杂性。
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