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目的：1．检测Notch1胞内段（NICD1）对人胶质瘤U251细胞NF-κB信号活性的影响2．比较NICD1与其衍生肽段ΔNICD1（1773-2230）对人胶质瘤U251细胞NF-κB信号活性影响的差异性3．检测NICD1与其衍生肽段ΔNICD1（1773-2230）对NF-κBp65和NF-κBp50表达水平的影响4．明确NICD1及其衍生肽段ΔNICD1（1773-2230）与NF-κBp50之间的相互作用关系方法：1．以pNL-IRES2-EGFP-NICD1为模板，通过PCR法扩增获取目的基因NICD1和ΔNICD1（1773-2230）序列，再以p3xFlag-CMV-10为目标载体，构建标签融合的真核表达载体p3xFlag-CMV-10-NICD1和p3xFlag-CMV-10-ΔNICD1。2．以p3xFlag-CMV-10-NICD1和p3xFlag-CMV-10-ΔNICD1分别转染人胶质瘤U251细胞，并以WesternBlot法鉴定NICD1和ΔNICD1在转染细胞中的表达情况。3．提取NICD1和ΔNICD1过表达的U251细胞的核蛋白，采用电泳迁移率分析实验（EMSA）检测NICD1和ΔNICD1过表达的U251细胞NF-κB的靶DNA结合活性。4．分别提取NICD1和ΔNICD1过表达的U251细胞的总蛋白或核蛋白，采用WesternBlot法检测胞内以及核内NF-κBp65和NF-κBp50的表达水平。5．对NICD1和ΔNICD1过表达的U251细胞，行NICD1、ΔNICD1、p65、p50免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察p65和p50在胞内的分布以及NICD1和ΔNICD1与p50在胞内的共定位情况。6．免疫共沉淀实验检测NICD1和其衍生肽段ΔNICD1（1773-2230）与NF-κBp50之间的相互作用。结果：1．成功建立了Flag标签融合的真核表达质粒载体p3xFlag-CMV-10-NICD1和p3xFlag-CMV-10-ΔNICD1，经酶切、测序、表达分析检测，确认重组载体正确无误。2．EMSA实验表明3xFlag-NICD1和3xFlag-ΔNICD1高表达的U251细胞内NF-κB的靶DNA序列的结合活性均增强。3．WesternBlot检测表明NICD1或ΔNICD1高表达的U251细胞内的p50和p65蛋白表达水平均明显增强。细胞核内的p50和p65水平较对照组显著增加。4．细胞免疫荧光染色观察见NICD1或ΔNICD1高表达的U251细胞内的p50和p65有明显的核转移现象，同时也观察到NICD1或ΔNICD1与p50在核内呈明显的共定位现象。5．免疫共沉淀实验显示Notch1胞内段NICD1和其衍生肽段ΔNICD1（1773-2230）与NF-κBp50之间存在相互作用关系。结论：1．NICD1在人胶质瘤U251细胞内高表达一方面可上调p50和p65的表达水平，另一方面可通过促进NF-κB激活和核转位来增强其活性。2．在人胶质瘤U251细胞内，NICD1可与NF-κB的p50亚基发生直接的相互作用。3．NICD1衍生片段（1773-2230）对于NF-κB信号有着与完整NICD1一致的活化效应。