文冠果种仁饼粕中总皂苷的提取纯化及其抗氧化、抑菌、抗肝癌活性

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Horus_Ra
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文冠果是集食用、生态、药用、环保、观赏、木材、生物质能于一体的落叶乔木。目前,随着人们对文冠果认识的加深,对其活性物质的研究在逐步增加,且对文冠果皂苷的研究也越来越多;但是文冠果的不同部位其皂苷种类、含量、结构存在非常大的差异,特别是种仁中的皂苷单体结构类型与种壳是否一致,不同单体之间生物活性是否有较大差异等方面现在尚不十分清楚。本文探讨了文冠果种仁总皂苷的提取纯化工艺参数,初步研究了文冠果种仁皂苷的抗氧化活性、抑菌特性及其抗肝癌活性,为进一步研究文冠果种仁总皂苷的抗肝癌分子机理打下试验基础。研究结果如下:1.通过单因素及正交试验考查了超声波辅助法提取文冠果种仁饼粕粉中总皂苷的主要影响因素,探讨确定了最佳提取参数。试验显示,在提取剂浓度为70%,超声温度为50℃,料液比为1:20(g/mL),超声功率为140 W时,文冠果种仁中提取的总皂苷得率可达2.67%。2.利用大孔树脂纯化文冠果种仁皂苷粗提物,探讨了几种常用树脂的吸附与解吸特性,选择其中对文冠果种仁皂苷有良好吸附性能的树脂,考察时间、pH值、浓度等主要因素对吸附与解吸效果影响的大小,确定其纯化的最佳条件。试验确定了XAD-16树脂为文冠果种仁分离纯化的最佳树脂,其吸附率和解吸率最高,最佳静态吸附的工艺条件为:吸附时间12h,解吸时间4 h,解吸剂70%乙醇,上样液pH=4:最佳动态吸附的工艺条件为:流速10 mL/min,上样液体积与柱体积之比为1.5:1。用该树脂纯化提取物三次,文冠果种仁皂苷提取物中总皂苷的浓度从较低的0.12 mg/mL提高到0.52 mg/mL3.研究了初步纯化后的文冠果种仁总皂苷提取物的抗氧化活性。以抗坏血酸(Vc)为对照品,测定了文冠果种仁总皂苷的还原力、清除DPPH自由基的能力、对羟自由基的清除作用及对O2-自由基的清除作用。试验表明,文冠果种仁总皂苷的还原能力和对羟自由基的清除作用大于同浓度的Vc,文冠果总皂苷清除DPPH自由基的能力和对O2-自由基的清除作用小于Vc。4.采用滤纸片渗透法考查了初步纯化后的文冠果种仁总皂苷提取物的抑菌特性。试验发现文冠果种仁总皂苷对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、假单胞菌均有不同程度的抑制作用,且发现它对假单胞菌的抑制作用最强,其MIC为3.6 mg/mL,对鼠伤寒菌的抑制作用最弱,其MIC达到4.8mg/mL。5.初步研究了纯化的文冠果种仁总皂苷的抗肝癌活性。采用MTT试验评价总皂苷提取物对人肝癌HepG2.细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用,结果发现总皂苷提取物处理HepG2细胞时间为24 h的IC50是9.672±0.3856 mg/L;细胞形态学和荧光染色证明了其对HepG2细胞具有凋亡诱导作用。
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