【摘 要】
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目的培养和鉴定大鼠脂肪干细胞(Adiposederivedstemcells,ADSCs),探讨脂肪干细胞跨胚层向表皮细胞分化的可能性。方法取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,用流式细胞术法
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目的培养和鉴定大鼠脂肪干细胞(Adiposederivedstemcells,ADSCs),探讨脂肪干细胞跨胚层向表皮细胞分化的可能性。方法取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,用流式细胞术法、免疫细胞化学法鉴定ADSCs的表面标志;诱导ADSCs的实验分为4组:①条件培养基诱导7天组;②条件培养基加入EGF(20ng/ml)诱导7天组;③条件培养基诱导4天,撤条件培养基,改10%FBS/DMEM培养3天组;④10%FBS/DMEM培养7天为对照组。诱导后经流式细胞术检测CK19、CK10/13的表达;细胞免疫化学法检测CK19的表达;流式细胞仪检测①组和④组细胞周期;观察各组细胞形态的变化。结果(1)流式细胞术检测ADSCs中CD49d、CD44表达的阳性率分别为90.32%、89.64%,CD106、CD34的表达的阳性率分别为0.46%、0.11%;细胞免疫化学法显示CD106在胞浆中呈阴性表达,而CD49d在胞浆中呈阳性表达。(2)流式细胞术检测示:条件培养基诱导7天组、条件培养基+EGF诱导7天组、条件培养基诱导4天,撤条件培养基,改10%FBS/DMEM培养3天组分别与对照组相比CK19、CK10/13表达的阳性率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);条件培养基+EGF诱导7天组、条件培养基诱导4天,撤条件培养基,改10%FBS/DMEM培养3天组分别与条件培养基诱导7天组相比CK19、CK10/13的阳性率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞免疫化学法检测各组CK19的表达与流失细胞术所测结果吻合。ADSCs①组中处于G0/1期的细胞数较ADSCs④组中处于G0/1期的细胞数明显下降(P<0.01),ADSCs①组中处于S期的细胞数较ADSCs④组中处于S期的细胞数明显升高(P<0.01)。诱导前、后细胞形态无明显变化。结论鉴定结果显示:所分离培养细胞的表面标志与文献报道的ADSCs的表面标志一致;经诱导ADSSCs具有向表皮细胞分化的潜能。
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