本论文在高通量杆状病毒表达系统的基础上发展了哺乳动物双杂交系统。将表达GAL4BD-诱饵融合蛋白的盒式结构、表达VP16AD-猎物融合蛋白的盒式结构以及上游激活序列、E1B基本启动子、gfp报告基因的盒式结构分别克隆在杆状病毒基因组上构建组成型的双杂交系统，并且引入Bsu36I的高通量、零背景的克隆方式。 　　为了提高传统哺乳动物双杂交系统的灵敏性，还发展了增强型、诱导型和诱导-增强型的双杂交系统。将编码大肠杆菌乳糖操纵子阻遏蛋白LacI的46-360氨基酸的区域或LacI的330-360氨基酸区域克隆在编码VP16激活结构域的C端，利用LacI蛋白形成四聚体可将4倍的激活结构域融合蛋白招募在启动子上，从而增强蛋白质相互作用的信号。将ARIAD公司赠送的响应雷帕霉素的基因表达系统也整合在哺乳动物双杂交系统中，并将SV40启动子替换成受雷帕霉素诱导的白介素Ⅱ的启动子。在雷帕霉素类似物存在条件下，FRB-p65或FRB-p65-HSF1融合蛋白与FKBP-ZFHD1融合蛋白发生二聚化，重构转录因子的活性，从而激活GAL4BD-诱饵融合蛋白与VP16AD-猎物融合蛋白的表达，使得重构GAL4BD-VP16AD转录因子的活性，最后激活报告基因gfp的表达。 　　本论文构建了组成型、增强型、诱导型和诱导-增强型四种双杂交系统。组成型双杂交系统载体p,增强型双杂交载体,诱导型双杂交系统,诱导-增强型双杂交载体。 　　为了验证组成型、增强型、诱导型及诱导增强型双杂交系统的有效性，以p53蛋白与大T抗原为蛋白质相互作用对，利用Bsu36I的克隆方式将其分别克隆在诱饵载体和猎物载体上，然后转染哺乳动物HEK293细胞。实验结果表明，增强型双杂交系统确实能够增强p53蛋白与大T抗原相互作用的信号；在10nM雷帕霉素类似物AP21967诱导24小时后，报告基因表达水平明显升高。