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铁线莲是毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L.)植物,是一类观赏价值高、具多种抗逆性的藤本花卉。本实验在收集国内外的铁线莲种质资源基础上,运用ISSR技术结合田间性状观察,对铁线莲遗传多样性进行研究;选择不同的父母本组合进行杂交,研究杂交技术,初步观察杂种后代性状,筛选观赏价值高并适宜南方栽培的品种;同时,进行铁线莲离体快繁技术的研究。研究结果将为铁线莲种质资源分类提供科学依据,为新品种选育提供理论基础。1.通过优化反应参数,建立了铁线莲ISSR-PCR分析的反应体系:25uL体系中含模板DNA40ng,引物浓度为0.4μM,dNTPs浓度为0.20mM,Taq酶的用量为1U,10×Buffer2μL;研究不同ISSR引物适宜的退火温度,筛选出13条多态性高的引物,PCR扩增程序为:94℃预变性 5min,94℃变性 50s,51.8-54℃退火 1min,72℃延伸1min,40个循环;72℃延伸10min,4℃下保存。对32份铁线莲材料及2个近缘属材料进行ISSR分析,共扩增出172条条带,平均每条引物扩增出13.23条谱带。13条引物共扩增出多态性位点168个,平均每个引物扩增多态性位点12.92个,多态性位点百分率为98.24%。ISSR分析结果显示,34份材料间的遗传相似距离在0.22～1.21之间;32份铁线莲材料在遗传距离为1.01处分为三大类,在遗传距离0.77处可分为13个小组。2.选择5个铁线莲亲本组合进行杂交试验,其中,’乌托邦’作为父本和’丹青’杂交组合没有获得种子,其余4个组合’丹青’和’乌托邦’、’波兰精神’和’丹青’、’克天使’和’王梦’’王梦’和’丹青’收获到105粒种子,平均结实数为21粒,五个组合平均结实率为70.93%;共有92粒铁线莲种子发芽,平均发芽百分数为69.02%;F1代播种苗的开花株数共33棵。从开花株中选出7株观赏性较高的植株。3.本试验探索了铁线莲’王梦’的外植体消毒方法和快繁较适培养基。’王梦’茎段的消毒处理以0.1%升汞溶液浸泡10-15min为好;不定芽增殖的最佳培养温度为30℃,培养养为:MSS3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;生根培养基为:MS+0.3 mg/L IBA+0.1mg/L NAA。