【摘 要】
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Streptomycetes M1菌株是辽宁省微生物科学研究院在农抗产生菌的研究中,从土壤中分离筛选到的有益菌株。为使其发酵液抑菌活性提高,生产成本降低,能大规模应用于生产,本项研究通
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Streptomycetes M1菌株是辽宁省微生物科学研究院在农抗产生菌的研究中,从土壤中分离筛选到的有益菌株。为使其发酵液抑菌活性提高,生产成本降低,能大规模应用于生产,本项研究通过紫外线对该菌株进行诱变处理,筛选出高效菌株,并对其液体和固体培养基配方和培养条件进行优化,以提高其抑菌活性,同时对其产生的抑菌活性成分进行分离提纯及初步的性质研究,为研制优良生防制剂及其应用开发奠定基础,试验结果如下:
紫外线诱变处理后,经过平板初筛和摇瓶复筛,在40株诱变菌株中选育到高效Streptomycetes M1-8菌株,其对黄瓜枯萎菌抑菌圈直径由12.8mm提高到了14.3mm。液体培养基配方和培养条件进行正交试验,结果表明:最适培养基配方为可溶性淀粉1%,玉米面1%,酵母膏1%,K<,2>HPO<,4> 0.12%,MgSO<,4> 0.08%,NaCl 0.08%,最适培养条件为:时间72h,温度31℃,装液量100mL/500mL,pH 7.5。优化后其液体培养液抑菌圈平均直径增大到23.7mm,抑菌作用提高了73.6%。
Streptomycetes M1-8菌株固体培养基配方及培养条件正交试验,结果表明:固体培养基配方为蚯蚓粪65%,玉米面20%,农田土10%,豆饼粉5%,CaO浓度为0.4%;培养条件为:含水量为40%,时间6d,接菌量1.0 mL/100g(含孢子数10<9>cfu/mL);
室内盆栽试验表明,用固体发酵产物浸种黄瓜种子,其发芽率高于对照发芽率。通过用不同含菌数的固体发酵产物处理后的土壤,培育长出的幼苗在株高,鲜重,地上干重,根系干重等方面都表现出较好的促生长作用,其中含菌数10<6>cfu/g处理效果较明显。
发酵液经预处理、大孔树脂柱层析、高效液相色谱等步骤,对菌株抑菌活性进行了分离提纯研究,在检验波长310nm时出现吸收峰,吸收峰峰形尖锐,对称性好,杂峰较小,说明采用该种方法可较精确的检测抑菌物质成分及含量。通过纸层析,纸电泳等试验最后确定该农用抗生素为弱碱性水溶性抗生素。
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