奥沙利铂对胰腺癌Panc-1细胞系的放射敏增作用

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目的:探讨新一代铂类化疗药物奥沙利铂(L-OHP)对人胰腺癌Panc-1细胞株的放射增敏作用及其机制,为胰腺癌的临床治疗提供理论依据。   方法:体外培养人胰腺癌Panc-1细胞,显微镜下观察细胞形态,定期换液及传代,待细胞生长良好,取对数生长期细胞进行试验。(1)MTT实验:测定不同浓度(0.5、1.0、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、300、500μg/ml)奥沙利铂对胰腺癌Panc-1细胞的生长抑制率(growth inhibitory rate,GIR),筛选出奥沙利铂的半数抑制浓度(IC50)(实验分组:药物组、对照组和空白组);采用小于IC50的低浓度奥沙利铂联合放射线作用于Panc-1细胞,通过计算放射增敏比初步判定奥沙利铂的放射增敏作用(实验分组:单纯放射组;放射联合药物处理组);(2)集落形成实验检测小于20%IC50(4μg/ml、8μg/ml)的奥沙利铂对Panc-1细胞的放射增敏作用,计算各组的集落形成率,利用“多靶单击"数学模型(S=1-(1-e-D/Do)N)进行曲线拟合,得到细胞存活曲线,并计算出放射组和放射联合药物组的放射敏感性相关参数;(3)流式细胞仪观察小于20%IC50(4μg/ml、8μg/ml)的奥沙利铂联合放射线作用下细胞周期的改变,并定量测定凋亡率变化;(4)应用免疫细胞化学方法研究小于20%IC50浓度下L-OHP联合放射线共同作用下对Panc-1细胞凋亡抑制基因survivin表达的影响。   实验(2)、(3)、(4)分为:空白对照组、单纯照射组(2、4、6、8Gy)、单纯药物处理组(L-OHP浓度为4μg/ml、8μg/ml)和药物加放疗组(4μg/ml、8μg/ml奥沙利铂分别联合2、4、6、8Gy剂量照射)。   数据处理采用SPSS17.0统计软件包。   结果:(1)MTT实验显示奥沙利铂对Pane-1细胞增殖有抑制作用,并且呈现出浓度和时间依赖性,药物作用48小时的IC50为44.639μg/ml;(2)集落形成实验表明:反映放射敏感性的指标,如:Do、Dq、SF2等在药物加放疗组较单纯照射组有所下降;(3)流式细胞术示:G0/G1期细胞减少,细胞周期被阻滞在S期和G2/M期,48h凋亡率变化有统计学意义(P<0.05);(4)药物处理后48小时免疫细胞化学方法显示survivin表达有不同程度的降低(P<0.05)。   结论:1.奥沙利铂能诱导Pane-1细胞凋亡,增加Pane-1细胞的放射敏感性,其机制可能与促进肿瘤细胞周期再分布有关;2.奥沙利铂联合放射线体外作用于人胰腺癌Panc-1细胞,能使凋亡抑制基因survivin表达降低,可能是奥沙利铂放化疗增敏的机制之一。
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