首乌藤黄酮的提取分离及生物活性研究

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首乌藤,为卫生部公布的药食同源中药品种之一,是何首乌的藤茎或带叶藤茎。对它的研究主要集中在种植、鉴别及临床应用方面,而对其化学成分尤其是黄酮类化合物的研究较少。本试验以市售经生药学鉴定的首乌藤为原料,对黄酮的提取工艺、分离纯化及生物活性进行了研究,结果如下(1)通过对比不同溶剂对于首乌藤黄酮的提取效果,确定乙醇为提取溶剂;(2)有机溶剂提取试验结果表明,各因素对首乌藤总黄酮得率的影响依次为:提取时间>乙醇浓度>提取温度>料液比。最佳工艺条件为:提取时间2.5h,乙醇浓度50%,提取温度70℃,料液比1:20。在此最佳工艺条件下提取2次,首乌藤总黄酮的得率是8.93%;(3)超声辅助提取试验结果表明,各因素对首乌藤总黄酮得率的影响依次为:超声功率>乙醇浓度>提取温度>提取时间。最佳工艺条件为:超声功率200W,乙醇浓度60%,提取温度50℃,提取时间40min。在此最佳工艺条件下提取2次,首乌藤总黄酮的得率是12.79%;超声波辅助法提取与常规法提取相比,总黄酮得率提高了43.23%;(4)超声辅助提取后所得到首乌藤黄酮粗品,经三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后,可得到不同的溶剂萃取物,其中正丁醇萃取物最多,其次为乙酸乙酯萃取物;(5)通过对10种树脂的静态吸附试验,确定了大孔树脂LS300B对首乌藤黄酮正丁醇萃取物具有较好的吸附和解吸性能,是一种理想的吸附剂,适宜于对首乌藤黄酮的分离;(6)对首乌藤黄酮正丁醇萃取物分别通过LS300B大孔吸附树脂柱色谱、聚酰胺柱色谱及硅胶柱色谱进行了纯化分离,得到了3个黄酮类组分,并通过聚酰胺薄层色谱及颜色反应进行鉴定,证明其30%乙醇洗脱细可能是双氢黄酮类物质:其50%乙醇洗脱组分及70%乙醇洗脱组分经聚酰胺柱色谱及硅胶柱色谱分离,经薄层色谱鉴定仍是混合物,需要进一步分离纯化;(7)通过非油体系体外活性试验得山,超声提取得到的首乌藤黄酮及相应的萃取物,在同浓度条件下与BHT比较,都具有较为明显的体外抗氧化活性。其中,还原能力的大小顺序为:水相残留物>超声提取物>正丁醇萃取物>BHT>乙酸乙酯萃取物;对·OH自由基、O2-·自由基及DPPH·自由基的清除作用最强的是首乌藤黄酮水相残留物,且对·OH自由基的清除能力高于BHT;(8)比较空白对照组,低、中、高剂量饲喂组小鼠的体重和各器官的重量,经过饲喂黄酮正丁醇萃取物的小鼠的各器官重量无显著的变化;(9)比较空白对照组,低、中、高剂量饲喂组可以看出,首乌藤黄酮正丁醇萃取物可以有效地降低血清、肝组织、脑组织中MDA的含量,特别是中、高剂量组达到了极显著水平;血清、肝组织、脑组织中的GSH-Px的活力和SOD活力都比空白对照组有提高,中、高剂量组几乎全部与空白组相比有极显著差异。中、高组血清、肝组织中CAT活力与空白组相比有显著差异。证明首乌藤黄酮是一种良好的抗氧化功能性化合物。研究表明,黄酮类化合物在首乌藤中不仅有较高的含量,而且有较高的生物活性,因此首乌藤具有良好的药用、食用价值,是一种极具开发前景的植物资源。
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