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第1章:p53功能正常的鼻咽癌细胞模型的建立目的:建立p53功能正常的鼻咽癌细胞模型.材料和方法:阳离子脂质体Lipofectamine2000介导,将携带野生型p53基因的质粒(pC53-SN3)和空载体质粒(pCMV-Neo-Bam)转染至p53功能缺陷的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2中.DNA损伤剂阿霉素200ng/ml处理细胞,Westernblotting分析阿霉素处理前后P53、P21蛋白表达变化,判断细胞p53基因功能状态.细胞生长曲线观察p53基因转染对鼻咽癌细胞增殖的影响.第2章:p53功能正常的鼻咽癌细胞的放射生物学特性.目的:了解p53基因功能正常的鼻咽癌细胞的放射生物学特性.材料和方法:鼻咽癌细胞CNE-1-wtp53、CNE-2-wtp53,予X射线照射2Gy,分别于照射后4、8、12、24小时提取细胞总蛋白,Western blotting分析P21蛋白表达与辐射时间的关系;分别于X射线照射0、2、5、10、15、20Gy后48小时提取细胞总蛋白,Western blotting分析P21蛋白表达与辐射剂量的关系;流式细胞仪检测细胞周期时相变化和细胞凋亡率;DAPI染色观察细胞凋亡的形态学改变;集落形成实验测定细胞剂量存活分数;采用线性二次函数模型(LQ模型)和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线,分别求出放射生物学参数:α、β、α/β值和D<,0>、Dq、N、SF<,2>值.第3章:p21反义寡核苷酸逆转鼻咽癌辐射抗性的实验研究.目的:应用p21反义寡核苷酸(p21 AS ODN)抑制辐射诱导的P21蛋白的表达,探讨其对p53功能正常的鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响.材料和方法:合成p21反义寡核苷酸序列(p21 AS ODN):5TGTCATGCTGGTCTGCCGCC-3;无义对照序列(p21 RD):5-CCGGTGAACGAGCGAGCACA-3.将p21 AS ODN和p21 RD转染到p53功能正常的鼻咽癌细胞中.流式细胞仪分析p21反义后对细胞周期及细胞凋亡的影响.BALB/c裸鼠体内实验观察p21AS ODN对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响.分为三组,A组:对照组,未行任何处理;B组:单纯放射组,X射线单次10Gy照射;C组:p21反义联合放射组,2.5mg/kg p21 AS ODN瘤体内直接注射,X射线单次10Gy照射.每周测量肿瘤体积2次.3周后处死裸鼠,取出瘤体,称取瘤重并照相,瘤组织送病理学检查.结论:1.鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的p53功能缺陷,转染野生型p53基因后,两种细胞获得正常的p53功能.2.p53功能正常的鼻咽癌细胞,辐射诱导的P21蛋白的表达在照射后24小时才出现表达上调,且P21蛋白的表达无辐射剂量依赖性.3.转染野生型p53基因可以提高p53功能缺陷的鼻咽癌细胞的放射敏感性.4.p21反义寡核苷酸能抑制辐射诱导的CNE-1-wtp53细胞P21蛋白的表达,并有较强的抑瘤作用.