【摘 要】
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本实验利用RNAi技术阻断在褪黑激素作用下的内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞中RORa基因的表达,应用荧光定量PCR技术检测干扰前后的RORa基因,以及与毛囊发育相关基因的表达情况,探
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本实验利用RNAi技术阻断在褪黑激素作用下的内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞中RORa基因的表达,应用荧光定量PCR技术检测干扰前后的RORa基因,以及与毛囊发育相关基因的表达情况,探讨RORa在褪黑激素促进绒毛生长中的作用,为进一步探索褪黑激素促进绒毛生长奠定了重要的理论基础。主要研究结果如下：1.本试验采用Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶联合消化,避免了由于长时间的胰蛋白酶处理而造成的细胞损伤,能够更好更加效率的分离培养成纤维细胞。2.利用shRNA转染绒山羊皮肤成纤维细胞48h后,经荧光定量PCR技术检测RORa基因的表达量,结果显示：转染后RORa mRNA表达量显著受到抑制(P<0.05),阴性对照组中的表达量几乎不受影响(P>0.05),说明该shRNA对RORa存在特异且高效的沉默作用。为进一步探索RORa基因在褪黑激素促进绒毛生长中的重要作用奠定基础,提供了新的研究方向。3.在干扰抑制RORa基因的基础上分析β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表达变化,添加褪黑激素后,β-catenin基因表达量显著增加(P<0.05),SFRP1基因表达量几乎不受影响(P>0.05),TCHHL1基因表达量显著降低(P<0.05)。转染后,三个基因的表达均呈现不同程度变化。提示了褪黑激素在绒毛生长中可能通过与RORa结合进而影响β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表达,促进绒毛生长。
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