奶牛乳房炎是奶牛的常见病和多发病之一,因其病因复杂,难以防治,给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失,还危害到人类健康。利用疫苗来预防和控制奶牛乳房炎是一种安全、经济、有效的方法。本研究对奶牛乳房炎主要病原菌进行了分离鉴定,初步建立了间接ELISA检测乳房炎多联苗抗体的方法,为客观评价疫苗效果及其深入研究提供了科学依据。采集大型奶牛养殖场的临床型和隐性乳房炎乳样89份,对其主要病原菌进行了分离鉴定及药敏试验。结果5份乳样未检出细菌,其余84份主要分离出无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等共计137株,其中无乳链球菌52株,占37.96%;停乳链球菌20株,占14.60%;金黄色葡萄球菌29株,占21.17%;大肠杆菌22株,占16.06%;其它14株,占10.21%。链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌占了所分离菌的89.79%,是奶牛奶牛乳房炎的主要病原菌。药敏试验结果表明:先锋霉素Ⅴ、新霉素、环丙沙星、丁胺卡那霉素对4种主要病原菌高度敏感,而青霉素G、链霉素、氨苄西林和复方新诺明低度或不敏感,产生耐药性,并且结合实际情况,探讨了奶牛乳房炎的综合防控措施,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。利用超声波破碎法制备无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌三可溶性抗原,根据常规的ELISA方法,通过反应体系的优化,初步建立了间接ELISA检测奶牛乳房炎多联苗抗体的方法。结果表明该方法特异性强,稳定性好,三可溶性抗原反应体系一致,确定了最佳反应条件:三抗原最适包被浓度4.0～6.0μg/mL,4℃包被作用24h;封闭液为1%BSA-PBST,37℃封闭30min;血清最适稀释度1∶200,酶标二抗工作浓度1:20 000,分别37℃作用30min;TMB底物系统显色测定。