本研究采用间接提取法从沼气池中提取了未培养微生物的宏基因组DNA，经Sephadex G200（2％PVPP）凝胶柱和电沈脱两步纯化后回收30-50kb的DNA片段并补平，以柯斯质粒pWEB：TNC为载体构建了一个约含三万个克隆的沼气池宏基因组文库。随机抽取其中14个克隆用BamH I进行酶切分析，结果显示所有的质粒酶切带型各不相同，说明文库克隆的DNA片段随机性比较强。文库中外源片段的最大长度为60 kb，最小长度为20 kb，平均长度为40kb，文库的总容量为1.2×106kb．利用活性筛选的方法得到3个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆和2个表达内切葡聚糖酶活性的克隆。　　 本工作对于其中一个在七叶苷平板上显黑色的阳性克隆pGXN100进行了亚克隆、序列测定和测序分析，结果表明：该克隆的外源片段包括一个全长为1863bp的ORF，编码620个氨基酸组成的蛋白质，其分子量（Mw）和等电点（PI）分别为65kD和5.69。与来源于产气克雷伯菌属的一个β-葡萄糖苷酶基因AN292在DNA和氨基酸水平上分别有76％和85％的同源性，并将该重组蛋白命名为Unglu100。利用Protscale、TMHMM、SMART等生物信息学软件分析表明，该重组蛋白没有明显的亲疏水性，但存在大量的跨膜结构区域，可能是磷酸转移酶系统PTS中β-葡萄糖苷酶特异性的转运蛋白组件。　　 PCR扩增该基因的ORF并将其连接到表达载体pETblue-2上转化大肠杆菌E．coli．Rosetta（DE3） plysS中进行表达。其表达产物由于在C端加上了六组氨酸标签（6×His Tag），因此使用镍离子亲和层析树脂（Ni-NTA）对重组蛋白Unglu100进行纯化和SDS-PAGE电泳分析。并对其酶学性质进行了初步研究，结果发现，该酶的最适PH为5，在PH4-6.5间仍保持较高的酶活力，到达80％以上；最适温度为45℃，但在37-50℃间仍保持了80％以上的较高酶活。由此可见，该酶作用的PH值和温度范围比较宽，耐受性比较高。最后，以pNPG为底物，在最适条件下测得该酶的比活力为25.4U/mL。