论文部分内容阅读
本论文以北京油鸡、狼山鸡、小尾寒羊为研究对象，采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻技术构建成纤维细胞库，采用生长曲线、染色体分析、同工酶分析等方法对细胞生长动态、遗传稳定性、种间交叉污染等进行检测；采用基因克隆技术和相关分析软件对北京油鸡GPAT基因进行克隆和序列分析。旨在细胞水平上保存该三种畜禽品种遗传资源，为在基因水平上保存北京油鸡特异性状奠定基础，为其他畜禽品种资源保存提供借鉴。试验结果如下： 1 所培养细胞的形态为长梭形或不规则三角形，生长时呈火焰状或旋涡状走势。 2 北京油鸡、狼山鸡、小尾寒羊细胞冻存前活率分别为97.5％、96.0％和97.0％；复苏后的活率分别为95.0％、94.5％、94.7％。 3 该成纤维细胞生长曲线呈典型的“S”型，第2天起细胞倍增时间约为24h，第5天起细胞生长渐缓。 4 染色体分析结果表明，北京油鸡、狼山鸡、小尾寒羊成纤维细胞均以二倍体为主，二倍体染色体数目分别占所观察数目的87.1％、86.7％和93.4％；染色体结构变异率分别为1.5％、0.8％和1.4％；染色体形态与前人报道的其他品种相比略有不同。 5 LDH同工酶谱带分析表明，北京油鸡、狼山鸡成纤维细胞为两条谱带，小尾寒羊为5条谱带：MDH同工酶谱带分析三种品种均为两条谱带，但小尾寒羊的迁移率明显高于北京油鸡、狼山鸡。 6 微生物污染检测显示，所培养的三种畜禽品种的成纤维细胞均呈阴性。 7 脂质体介导质粒pEGFP-N3分别转染三种品种的成纤维细胞，10h后均可获得较好的转染效果。 8 北京油鸡GPAT基因克隆和序列分析结果显示：该基因长度为953bp，其中含288A，177C，272T，216G，（A+T）％为58.76％，（G+C）％为41.24％；与已发表的鸡的GPAT相比其同源性为84.63％，碱基变异率为15.37％，在365 bp处的左翼有5个碱基插入，在423-429bp处有5个碱基缺失，在631处有1个碱基缺失；与人的该基因序列相比，其同源性为81.41％，北京油鸡该序列在243bp和326bp处各有3个和2个碱基缺失；与小鼠的该基因序列相比，其同源性为78.09％，北京油鸡该序列在145bp和556bp处各有1个碱基缺失；利用Oligo6软件分析，该序列含有5个HaeⅢ酶切位点，有2个Alw26 Ⅰ酶切位点3个Taq Ⅰ酶切位点。