【摘 要】
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目的：克隆并表达犬弓首线虫感染期幼虫粘蛋白(Tc-MUC-5)编码基因,初步研究重组Tc-MUC-5纯化蛋白的免疫学特性方法孵育犬弓首线虫的感染期幼虫,提取总RNA。方法：利用美国国家生
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目的：克隆并表达犬弓首线虫感染期幼虫粘蛋白(Tc-MUC-5)编码基因,初步研究重组Tc-MUC-5纯化蛋白的免疫学特性方法孵育犬弓首线虫的感染期幼虫,提取总RNA。方法：利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)的相关信息,设计该基因的特异性引物,RT-PCR技术扩增犬弓首线虫感染期幼虫粘蛋白基因Tc-MUC-5,与已知序列进行同源性比较后,插入原核表达质粒pET-28a(+)中。重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中转化,经IPTG诱导表达的产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,用镍离子金属螯合剂(Ni-IDA)亲和层析纯化表达产物。WesternBlotting分别检测用纯化的重组蛋白免疫SD大鼠后所获得的血清及被犬弓首线虫感染期幼虫所感染的小鼠、兔的血清。结果：重组质粒pET-28a(+)-Tc-MUC-5构建成功,IPTG诱导获得可溶性表达的重组蛋白。经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别;同时,也能被感染了犬弓首线虫感染期幼虫的小鼠、兔血清识别。结论：含犬弓首线虫感染期幼虫粘蛋白基因Tc-MUC-5的重组质粒可在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达出具有免疫活性的重组蛋白,为进一步将其用作犬弓首线虫病的早期诊断抗原奠定了实验基础。
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