甘蓝型油菜四种花色花器官中花色苷的提取及鉴定

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甘蓝型油菜(Brassica napus L.)作为我国主要油料作物,是食用植物油、蛋白质饲料、能源作物和工业原料的重要来源。油菜花色是油菜重要的观赏性状之一。花色素的研究是花色改良的基础,花色与花色素关系的阐明使花色育种工作更具有方向性。本论文以甘蓝型油菜白色花品系W01、黄色花品系中双11、粉色花品系P05和橘红色花品系R03为材料,使用高效液相色谱仪研究甘蓝型油菜花器官花色苷的色谱分离条件和超声波辅助法提取花色苷的最优条件,并对其花色苷总量进行测定。同时采用超高效液相色谱串联质谱技术(UPLC-HESI-MS)对使用超声波辅助法提取的花色苷进行鉴定和分析。主要研究结果如下:1、构建了HPLC测试方法,利用此方法,优化超声波辅助法提取花色苷的条件。通过单因素试验和正交试验,分析有机溶剂种类、乙醇浓度、料液比、萃取时间和萃取次数对甘蓝型油菜花器官花色苷萃取量的影响,确定了超声波辅助法提取花色苷的最优条件。2、以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为标准品,HPLC法测定四种花色材料不同发育时期花器官的花色苷总量。四种花色材料花柄、萼片中均未检测到花色苷;白花和黄花花瓣、花药、雌蕊中未检测到花色苷;橘红花和粉花花瓣、花药和雌蕊均含有花色苷。3、使用超高效液相色谱串联质谱对四种花色材料不同发育时期花器官的花色苷组分进行分析。共鉴定出15种花色苷,分别为飞燕草素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3,5-葡萄糖苷、飞燕草素-3-O-β-吡喃葡萄糖苷、矢车菊素-3-双葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-(2’’-O-β-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡萄糖苷)、矢车菊素3-O-葡萄糖苷,矮牵牛素-3,5-O-己糖苷、矮牵牛素-3-O-槐糖苷、矮牵牛素-3-O-β-吡喃葡萄糖苷和矮牵牛素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷。其中飞燕草素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3,5-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3,5-O-己糖苷等都有1种同分异构体。4、飞燕草素-3-O-β-吡喃葡萄糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-O-β-吡喃葡萄糖苷是影响橘红花和粉花花瓣颜色深浅程度的重要因素,而矢车菊素-3-O-(2’’-O-β-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡萄糖苷)和矮牵牛素-3-O-槐糖苷对橘红花和粉花花瓣的呈色起关键作用;飞燕草素-3,5-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3,5-O-己糖苷对橘红花花药的呈色起重要作用;飞燕草素-3,5-葡萄糖苷(Dp3)和矢车菊素-3-O-(2’’-O-β-吡喃葡萄糖苷-β-吡喃葡萄糖苷)对粉花花药的呈色起重要作用;飞燕草素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷及其同分异构体与矮牵牛素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷对橘红花雌蕊的呈色起重要作用。飞燕草素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-咖啡酰葡萄糖苷-5-葡萄糖苷对粉花雌蕊的呈色起重要作用。
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