【摘 要】
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对Trichosporon loubierii(路比利丝孢酵母)ECU1040发酵表达环氧水解酶进行了系统优化.研究表明,缩水甘油苯基醚(PGE)可有效地诱导环氧水解酶的生物合成,但高浓度的PGE对细胞
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对Trichosporon loubierii(路比利丝孢酵母)ECU1040发酵表达环氧水解酶进行了系统优化.研究表明,缩水甘油苯基醚(PGE)可有效地诱导环氧水解酶的生物合成,但高浓度的PGE对细胞的生长有明显抑制作用.在摇瓶培养中使用邻苯二甲酸二丁酯溶解PGE,维持培养基中较低的PGE浓度,促进了酶的合成.尽管甘油作碳源时比活最高,但添加葡萄糖能促进细胞的生长.微量元素对酶的合成有显著影响.通过添加葡萄糖和微量元素并降低培养基中磷元素的浓度,使摇瓶培养中酶的产量提高了150﹪.应用流加发酵策略,将诱导物PGE与营养物质一起进行流加,使酶的产量达到312U/L,较优化前提高了6.9倍,比活为23.7U/gDCW.高碘酸钠可氧化环氧水解酶的水解产物邻二醇,残留的高碘酸钠氧化肾上腺素生成有色的产物.对高碘酸钠-肾上腺素显色法测定环氧水解酶的条件进行了考察.吸光度OD<,490>与邻二醇浓度成线性关系.用环氧水解酶粗酶(丝孢酵母ECU1040的无细胞提取物)对新方法进行了检验.环氧化物(如PGE)、蛋白质(如牛血清白蛋白)、氯化钠和硫酸铵对反应没有干扰,表明此方法可应用于环氧水解酶纯化过程中酶活的快速测定.
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