人胚胎干细胞的分离、体外培养及初步鉴定

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目的:用组织块培养法,在不添加细胞因子的情况下,培养观察原代人胚胎干细胞(EG细胞)生长,进行初步鉴定。以探讨体外培养原代EG细胞的新方法。 方法:取5~10周流产胚胎的背侧肠系膜、生殖腺嵴及中肾嵴,进行组织块培养。用源于自身胚胎组织的成纤维细胞作为饲养层,在不添加任何细胞因子的条件下,观察EG细胞生长及集落形成的情况,利用Giemsa染色法及组织化学方法对其进行鉴定。 结果:培养12小时后,成纤维细胞开始在组织块周围出现;24小时后,EG细胞散在出现;4~20天后,在成纤维细胞上逐渐出现EG细胞集落,细胞生长良好。EG细胞碱性磷酸酶活性高表达;染色体核型分析为正常二倍体核型。本实验共收集5~10周人胚胎42例,29例观察到原代EG细胞集落生长。 结论:用组织块培养法,体外培养人胚胎背侧肠系膜、生殖腺嵴及中肾嵴,利用源于自身胚胎组织的成纤维细胞作为饲养层,在不加任何细胞因子的条件下,可分离培养得到原代EG细胞,成功率高。
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