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研究背景：干扰素是一类广谱抗病毒、影响细胞生长、调节细胞免疫等多功能蛋白质。干扰素在临床应用方面十分广泛，尤其针对病毒性疾病有很好的疗效。普通干扰素的缺陷在于体内半衰期短，难以持久地抑制病毒。使得长效干扰素的研发有着重要的意义。人类干扰素的研究取得了长足的进步，聚乙二醇人干扰素已经实现了商品化，如佩乐能和派罗欣。而聚乙二醇化猪干扰素研究进展较为缓慢，目前国内尚没有相关药品上市和有效专利。研究目的：建立一种简便的制备聚乙二醇化重组猪干扰素方法，获得生物活性保留较好的单聚乙二醇干扰素。研究方法：在重组猪干扰素融合蛋白可溶性表达的基础上，使用EK酶将融合蛋白酶切，镍柱纯化后，制成干扰素原液。根据重组猪α干扰素的氨基酸序列特点，分别采用了相对分子质量为20kDa的直链型mPEG-ALD（单甲氧基聚乙二醇丙醛）和mPEG-SPA（单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯）修饰重组猪α干扰素。优化重组猪干扰素的聚乙二醇化条件，使用mPEG-ALD大量修饰rpoIFNα，采用SP阳离子交换层析法纯化单PEG修饰偶联物，SDS-PAGE检测修饰产物，运用细胞病变抑制法对其生物活性进行了初步研究。研究成果：（1）制备重组猪α干扰素的纯度在90%以上，达到初步实验研究的要求。（2）通过优化PEG修饰干扰素的条件，筛选出两种PEG修饰剂的最优修饰反应条件：①PEG-ALD修饰的最优条件：50mmol/L PB，pH=6.0、4℃、（PEG/protein）摩尔比为3：1，反应24h。②mPEG-SPA修饰的最优条件：50mmol/L PB中，pH=9.0、4℃、（PEG/protein）摩尔比为5:1，反应2h。（3）PEG-ALD对rpoIFNα的单修饰率达到60%以上，单聚乙二醇化干扰素的活性达到未修饰干扰素的2.9%。