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目的 探讨IFN-α(α-干扰素)和IFN-γ(γ-干扰素)对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响及作用机制。旨在找到安全、有效、实用的淋巴管生成抑制剂。 材料和方法 本实验所用淋巴管内皮细胞来自猪的胸导管。1、淋巴管内皮细胞的鉴定:应用LYVE-1(淋巴管内皮透明质酸受体1)和VEGFR-3(血管内皮生长因子受体-3)特异性抗体进行鉴定。2、光镜和电镜观察淋巴管内皮细胞的形态和超微结构。3、抑制实验:本实验分为两大组:IFN-α组和IFN-γ组。每大组分别采用划线法和MTT法观察两种因子对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响。(1)划线法:IFN-α组和IFN-γ组分别包括各自的对照组和3种浓度的实验组。(2)MTT法:IFN-α组和IFN-γ组包括对照组和6种浓度的实验组。4、细胞凋亡实验:应用Caspase染色法和Hoechst染色法进行细胞凋亡实验。5、干扰素活体实验:在活体兔的两个后肢上切断淋巴管并分别注射IFN-α和生理盐水,以观察淋巴管的再生情况。 结果 1、淋巴管内皮细胞的鉴定:经LYVE-1鉴定和VEGFR-3鉴定,为典型淋巴管内皮细胞。2、光镜和电镜观察:光镜下淋巴管内皮细胞呈特征性“鹅卵石状”或“铺路石状”镶嵌排列;电镜下观察到淋巴管内皮细胞的超微结构,细胞间有类似桥粒样结构。3、划线法:与对照组相比,当IFN-α和IFN-γ的浓度达到1000ng/ml时,两者对淋巴管内皮细胞的增殖和游走都有明显的抑制作用(P<0.01)。4、MTT法:当IFN-α和IFN-γ的浓度达到2000ng/ml时,两者对内皮细胞的增殖具有显著的抑制作用(P<0.01)。5、凋亡实验:(1)Caspase染色法证实,经IFN-α和IFN-γ处理后的淋巴管内皮细胞,阳性表达为胞浆呈黄色或棕黄色染色。(2)Hoechst染色证实,经IFN-α和IFN-γ处理后的淋巴管内皮细胞,可观察到其核周围有凋亡小体。6、干扰素活体实验:手术切断兔后肢淋巴管后16天,生理盐水侧淋巴管已愈合,无染料渗漏,IFN-α侧仍有大量染料渗漏。 结论 1、IFN-α和IFN-γ对淋巴管内皮细胞的增殖和游走具有明显的抑制作用。2、IFN-α和IFN-γ具有促进淋巴管内皮细胞凋亡的作用。