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近年来,纳米发光复合材料倍受关注,并作为发光探针应用于各种生物检测中。与传统有机染料相比,发光纳米粒子的发光更强、稳定性更高。为了方便对纳米粒子进行表面修饰,通常制成核壳型复合纳米粒子,其中以二氧化硅为外壳的复合荧光纳米粒子因具有良好的水溶性、生物亲和性、易于制备、分离和表面修饰,作为标记物应用于生物分析,可以显著提高检测的灵敏度,有望发展成为一类新型的具有巨大发展前景的发光生物标记材料。本研究采用反相微乳液法合成荧光素-二氧化硅复合纳米粒子(FITC/SiO2composite nanoparticles),确定了前驱物(FITC-APS)的最佳加入量。研究结果表明,在常温下,微乳液的最佳配比为正硅酸乙酯：环己烷：正己醇：曲拉通=0.1：10：4：4,合成的荧光素-二氧化硅复合纳米粒子一周之后的荧光强度为原来的90%。对制备的纳米粒子进行表征,TEM实验表明合成粒子的分散性良好,合成粒子的粒径在80nm左右,与粒度分布实验结果基本一致。IR光谱表明,合成粒子表面具有氨基。研究发现,能否形成稳定的复合纳米粒子,与壳层厚度没有很大的关系,主要是由两者的电性决定的。并不是所有的亲水性材料都能直接通过微乳液法形成稳定的复合纳米粒子,但可以通过改变实验条件调节相关材料的电性来实现。用制备的纳米粒子检测牛血清白蛋白,确定了最佳检测条件,在0.050-0.55μg/mL的浓度范围内,纳米粒子的荧光强度与BSA的浓度有较好的线性关系,线性方程为y=578.42c+10.99,相关系数r=0.9789,检出限为14μ/L。对浓度为0.40mg/L的BSA进行了11次平行测定,RSD为2.5%。在pH为8.50的磷酸缓冲溶液中,复合纳米粒子可以与亲和素通过静电引力结合。被标记的亲和素仍然保持原有的生物活性,并且和生物素存在特异性结合。以滤膜为载体,被标记的亲和素-生物素复合物的荧光强度与亲和素在0.2-1.4μg/mL的浓度范围内呈现较好的线性关系,回归方程为y=355.91c+107.58,相关系数r=0.9821,这就为生物素-亲和素系统的应用奠定了实验基础。