三七总皂甙对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响及其分子机制研究

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目的:目前,吸毒已成为全球性公害之一,由此引发的公共卫生和社会安全问题日益严重,对吸毒人员的治疗已成为亟待解决的医学问题,也具有重要的现实意义。长期应用依赖性物质,机体会形成一种病理性稳态,一旦减少应用剂量或停止应用,就会表现出自主神经、躯体运动系统及行为方面的异常症候即戒断症状,使戒断者痛苦不堪,强迫其继续用药行为。它的形成机理十分复杂,目前尚不清楚。有研究表明,胞内多条信号传导通路参与了药物依赖的形成,Ca<'2+>-CaM-CaMK-CREB是其中之一;对非阿片系统神经递质的研究也相当活跃,其中最受关注的是胆碱能系统。 中药治疗药物依赖历史悠久,因其可多层次、多靶点、多环节的发挥作用,且毒副作用小,逐渐成为药物依赖治疗的一个重要研究方向。三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)为一传统中药,其主要成分三七总皂甙(PanaxNotoginseng Saponins,PNS)具有多种生理药理作用。有研究报道,PNS能够缓解阿片类药物戒断症状,但其具体机制尚不完全清楚。本课题的主要目的是探讨PNS对吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>和m2、m4、m5乙酰胆碱受体(AChR)mRNA表达,以及皮质m2、m5AChR蛋白表达的影响,从而探索PNS抑制阿片类药物依赖的作用途径和神经生物学机制。 方法:健康Wistar雄性大鼠72只,随机分为6组:生理盐水对照组(CON组)、吗啡依赖组(MOR组)、纳络酮催促戒断组(NAL组)、三七总皂甙100、200、400mg·kg<'-1>组(PNS<,100>、PNS<,200>、PNS<,400>组)。以剂量递增法连续5天皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型,以纳络酮5mg·kg<'-1>单次腹腔注射建立吗啡戒断模型;记数大鼠的体重变化和跳跃次数以鉴别模型建立成功与否。模型建立后取大鼠大脑皮质(简称皮质)、海马和纹状体,采用流式细胞术测定其神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>;RT-PCR方法检测大鼠皮质、海马和纹状体m2、m4、m5AchRmRNA表达的变化;Western-blot方法检测大鼠皮质m2、m5AchR蛋白表达的变化。 结果 1、大鼠吗啡依赖模型的建立及PNS对吗啡戒断综合征的影响NAL催促戒断后大鼠体重下降>2%,跳跃次数明显多于MOR组(P<0.01),说明吗啡依赖和催促戒断模型建立成功。三种不同剂量PNS(100、200和400mg·kg<'-1>)均可抑制戒断大鼠体重减轻和跳跃的发生,且剂量越大,效果越明显。 2、PNS对吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>的影响MOR.组大鼠皮质、海马和纹状体神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>的平均荧光强度较CON组显著增强(P<0.01);NAL,组[Ca<'2+>]<,i>的平均荧光强度与MOR组相比显著下降(P<0.01);PNS<,100>组大鼠皮质和海马神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>的平均荧光强度显著高于NAL组(P<0.05),而纹状体神经细胞中无明显变化(P>0.05);与NAL组相比,PNS<,200>组、PNS<,400>组大鼠皮质、海马和纹状体神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>的平均荧光强度显著升高(P<0.05或P<0.01)。 3、PNS对吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体m2 AChRmRNA表达的影响MOR组大鼠皮质中m2 AChR mRNA表达较CON组明显增高(P<0.01),而在海马和纹状体中无显著性差异(P>0.05):NAL组皮质、海马和纹状体m2 AChR mRNA的表达水平较CON组和MOR组显著增加(P<0.05或P<0.01);PNS<,100>组、PNS<,200>组、PNS<,400>组在皮质、海马和纹状体中m2 AChR mRNA表达显著低于NAL组(P<0.05或P<0.01)(皮质PNS<,100>组,纹状体PNS<,100>组、PNS<,200>组除外),并呈剂量依赖性。 4、PNS对吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体m4 AChRmRNA表达的影响MOR组大鼠海马中m4 AChR mRNA表达较CON组明显增高(P<0.01),而在皮质和纹状体中无显著性差异(p>0.05);NAL组皮质、海马和纹状体m4 AChR mRNA的表达水平较CON组和MOR组显著增加(P<0.01);PNS<,100>组、PNS<,200>组、PNS<,400>组在皮质、海马和纹状体中m4 AChRmRNA表达显著低于NAL组(P<0.05或P<0.01)(皮质PNS<,100>组、PNS<,200>组除外),并呈剂量依赖性。 5、PNS对吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体m5 AChRmRNA表达的影响MOR组大鼠皮质、海马和纹状体中m5 AChR mRNA表达明显高于CON组(P<0.01);NAL组皮质、海马和纹状体m5AChR mRNA的表达水平较CON组和MOR组增加更为显著(P<0.01);PNS<,100>组大鼠皮质和纹状体m5 AChR mRNA表达低于NAL组(P<0.05),海马组织中无明显变化(p>0.05);PNS<,200>组、PNS<<400>组m5 AChR mRNA在皮质、海马和纹状体的表达水平较NAL组显著降低(P<0.01),并呈剂量依赖性。 6、PNS对吗啡戒断大鼠皮质m2、m5 AchR蛋白表达的影响MOR组大鼠皮质中m2、m5AchR蛋白表达较CON组有增高趋势;NAL组m2、m5AchR的蛋白表达水平较CON组和MOR组显著增加(P<0.01);PNS<,100>组、PNS<,200>组、PNS<,400>组m2、m5AchR蛋白表达显著低于NAL组(P<0.01),并呈剂量依赖性。 结论 1、PNS可剂量依赖性地抑制纳络酮催促诱导的吗啡依赖大鼠戒断症状。 2、PNS可以剂量依赖地抑制吗啡戒断大鼠皮质、海马和纹状体神经细胞内[Ca<'2+>]<,i>的升高,表明:PNS对吗啡依赖大鼠催促戒断症状的抑制作用可能与其对中枢[Ca<'2+>]<,i>的调节有关。 3、本研究首次证实PNS对纳络酮催促诱导的吗啡依赖大鼠戒断症状的抑制作用可能是通过调节皮质、海马和纹状体内m2、m4、m5 AchR mRNA表达以及皮质m2、m5AChR蛋白表达来实现的。
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