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目的：
在以大鼠肝切除再生为模型研究细胞G0/G1期转换的前期工作中，发现一个新蛋白LRRC48，该蛋白在大鼠肝切除后短期内表达迅速上调，持续两小时后开始下降，而在与其相对应的假手术组中，该蛋白的表达始终处于低水平。而对LRRC48的功能目前尚无研究。本课题运用分子生物学及细胞生物学手段研究LRRC48对肝癌细胞GBRH-7919G0/G1期转换、增殖及转移能力等恶性表型的影响，以期增进对LRRC48功能的深入理解，从而可能对肿瘤防治产生积极影响。
方法：
1．构建真核表达载体HA-pcDNA3.1-LRRC48，进行PCR、双酶切及测序鉴定；
2．培养大鼠肝癌细胞GBRH-7919，筛选其最低G418致死浓度；
3．将构建好的质粒载体HA-pcDNA3.1-LRRC48及其对照空质粒HA-pcDNA3.1分别转染7919;同时将质粒RNAi-LRRC48和阴性对照RNAis分别转染细胞7919;
4．分别以G418筛选获得具有G418抗性的过表达和低表达LRRC48的细胞单克隆，半定量PCR和△△CT法荧光定量PCR检测鉴定阳性克隆；
5．CCK-8法测定halc/7919、RNAi/7919和7919细胞的增殖生长曲线：
6．PI单染法流式细胞术检测halc/7919、RNAi/7919和7919细胞周期时相分布；
7．Westernblotting检测halc/7919、RNAi/7919和7919细胞cyclinD1表达量差异；
8．建立血清饥饿法G0/G1期阻断模型，流式细胞术检测halc/7919、RNAi/7919和7919细胞饥饿后G0/G1期阻断率及重新释放后返回细胞增殖期的效率；
9．Westernblotting检测halc/7919、RNAi/7919和7919细胞饥饿及释放后cyclinDl的变化，以衡量过表达或低表达LRRC48后细胞G0期阻断及阻断后重新释放返回细胞增殖周期的效率；
10.Transwell迁移实验检测过表达细胞halc/7919、低表达细胞RNAi/7919和对照7919细胞迁移能力的差异；
结果：
1．成功构建真核表达载体HA-pcDNA3.1-LRRC48;
2．筛选确定GBRH-7919细胞最低G418致死浓度为500μg/ml。经G418筛选获得高表达及低表达LRRC48基因的稳定克隆，经过半定量PCR验证，结果表明获稳定过表达单克隆细胞3株及对照单克隆细胞1株，同时获得稳定低表达的RNAi单克隆细胞2株及RNAi阴性对照单克隆细胞1株；
3．荧光定量PCR检测显示过表达对照单克隆细胞ha/7919-k中LRRC48表达量接近原始细胞7919，过表达单克隆细胞halc/7919-1、halc/7919-2和halc/7919-3的LRRC48表达量分别为7919的14.458倍、39.04和3.942倍；同时，荧光定量PCR检测显示RNAi阴性对照细胞克隆RNAi/7919-d的LRRC48表达量接近原始细胞7919，而低表达LRRC48的RNAi单克隆细胞RNAi/7919-1、RNAi/7919-2中LRRC48的表达量分别为7919的0.411倍和0.77倍：
4．CCK-8法测定halc/7919、RNAi/7919与7919的生长曲线结果显示，三组细胞的增殖速率无明显差异；
5．PI单染法流式细胞术检测上述halc/7919、RNAi/7919与7919细胞周期时相分布，结果显示各细胞之间时相分布无明显差异(P＞0.05)，增殖指数PI也无显著差异（P＞0.05）；
6．Westernblotting检测显示，过表达细胞halc/7919-1和halc/7919-2中细胞周期素cyclinD1表达量低于对照细胞，RNAi细胞RNAi/7919-1和RNAi/7919-2中cyclinD1表达量亦低于对照细胞；而两组细胞对应的对照细胞ha/7919-k及RNAi/7919-d中cyclinD1表达量与7919细胞接近。
7．流式细胞术检测无血清饥饿48小时后的halc/7919、RNAi/7919和7919细胞，结果显示各细胞的G0/G1期阻断比例差别无统计学意义（P＞0.05）；流式细胞术检测阻断后恢复10％胎牛血清培养基培养释放22小时各细胞G0/G1期还原的比例，结果显示各细胞还原比例无显著差别（P＞0.05），即差别无统计学意义。
8．Westernblotting检测过表达和低表达各单克隆细胞无血清饥饿48小时及恢复10％胎牛血清培养释放6小时后cyclinD1表达量的变化，结果经ImageJ软件分析显示，对照ha/7919-k、RNAi/7919-d与7919细胞血清饥饿后和释放后cyclinD1表达量均接近；过表达细胞和RNAi细胞血清饥饿后cyclinD1表达量下降均较7919多，释放后cyclinD1表达量升高也较多；
9．Transwell肿瘤细胞迁移能力检测显示对照ha/7919-k、RNAi/7919-d和7919细胞迁移能力一致；过表达细胞halc/7919与7919相比，迁移能力明显增强；而RNAi/7919与7919相比，迁移能力明显减弱。
结论：
1．成功获得LRRC48基因过表达和低表达单克隆细胞，并经半定量RT-PCR和real-timePCR鉴定证实；
2．CCK-8法生长曲线测定结果表明LRRC48过表达或者低表达对细胞增殖速率无影响；
3．流式光度数结果显示过表达或低表达LRRC48基因对细胞周期时相分布末见显著影响，对血清饥饿阻断及释放后细胞周期时相分布亦未见显著影响。
4．Westernblotting鉴定cyclinD1表达量，结果显示LRRC48过表达和低表达均使cyclinD1的表达量下降；
5．Westernbloting检测各细胞周期阻断及阻断后再释放返回增殖周期效率，结果提示LRRC48无论过表达还是低表达都促使大鼠肝癌细胞GBRH-7919更易经血清饥饿被阻断进入G0期，也更易经补给血清培养释放重新返回增殖周期。
6．Transwell迁移实验测定结果表明LRRC48基因过表达使7919细胞迁移能力明显增强；LRRC48基因低表达使7919细胞迁移能力明显减弱。