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目的：足细胞裂孔隔膜是肾小球血液滤过屏障的最重要部分,多个足细胞特异表达的蛋白分子nephrin、podocin、CD2AP及α-actinin-4等参与遗传性肾病和一些获得性肾病蛋白尿的发生与发展。在不同类型的大鼠肾病模型中,对足细胞相关分子的表达情况持有不同意见,其内在机制尚未明确。本研究观察足细胞相关分子在阿霉素肾病大鼠模型中不同病理时期的表达及共定位分布,研究其与肾病病变过程的相互作用,探讨在蛋白尿发生发展过程中足细胞相关分子的作用机制。
方法：建立阿霉素大鼠肾病模型,实验分为模型组(阿霉素肾病大鼠30只)和对照组(正常大鼠30只)。观察1、2、4、6和8周各项指标的变化;
①24h尿蛋白定量、血浆白蛋白、血胆固醇、血肌酐和血尿素氮;
②两组各时间点取肾皮质进行光镜和电镜检测；
③采用双标准曲线法进行荧光定量PCR检测肾皮质部的podocin、nephrin、CD2AP及α-actinin-4的mRNA表达；
④应用双重免疫荧光法观察肾小球podocin和nephrin蛋白的共定位分布；
⑤采用western blot的方法检测肾皮质部的podocin的蛋白表达。
结果：
①模型组出现大量蛋白尿、高脂血症,肾功能减退,表现为典型的肾病综合征。
②模型组病理改变由微小病变型逐渐发展至局灶节段性肾小球硬化型,电镜下可见足细胞在病变早期出现足突增宽融合,晚期足突消失、核固缩。
③模型组与对照组比较:podocin的mRNA表达1周时升高,2周时升高达峰值,4周后下降；nephrin的mRNA表达1周时升高达峰值,4周后下降；CD2ALP的mRNA表达1周时无明显改变,2周时升高,4周时升高达峰值,6周后下降；α-actinin_4的mRNA表达1周时无明显改变,2周时升高,4周时升高达峰值,6～8周时无明显改变。
④模型组荧光染色可见nephrin与podocin在大鼠肾小球内的分布,随病变进展,由正常的沿肾小球血管襻呈均匀线性分布转变为呈不连续颗粒状分布,而且重叠程度逐渐减少。
⑤模型组与对照组比较:podocin蛋白表达1、2、4、6周时均升高,8周时下降。
结论：
在阿霉素肾病大鼠模型中,足细胞损伤随病程进展进行性加重,导致大量蛋白尿；足细胞相关蛋白分子nephrin、podocin、CD2AP、α-actinin-4的mRNA表达早期微小病变时升高,晚期局灶性节段性硬化时下降,说明各足细胞相关蛋白分子的表达随着病理类型的改变发生变化:podocin的mRNA及蛋白表达早期微小病变时升高,同时发现分布异常,晚期局灶性节段性硬化时表达下降,而且分布异常进行性加重；podocin与nephrin在肾病的发展过程中共定位分布异常,不能形成正常的复合体结构,引起肾小球滤过屏障功能障碍,导致大量蛋白尿的发生。本研究提示足细胞相关蛋白分子的表达及分布与阿霉素大鼠肾脏病变的发生发展密切相关。