白藜芦醇对肠缺血再灌注大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

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目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对实验性大鼠肠缺血再灌注所致肠黏膜屏障损伤的保护作用及其可能机制。方法选用24只成年雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):①假手术组(SO):仅分离肠系膜上动脉(SMA)根部而不作阻断;②肠缺血再灌注+生理盐水组(I/R):夹闭肠系膜上动脉45min后放松血管夹再灌注6h,灌注前5min经尾静脉注射生理盐水0.5ml;③肠缺血再灌注+白藜芦醇组(RES):夹闭SMA后再灌注6h,灌注前5min经尾静脉注射RES(20mg/kg)。所有动物术前禁食12h,允许自由饮水。腹正中切口入腹,分离SMA,用无损伤血管夹夹闭SMA起始部45min后去除血管夹再灌注6h。操作过程中,所有动物腹腔注入37℃生理盐水0.5 ml/kg,以保持血流动力学稳定。各组大鼠再灌注6h后处死,立即分别抽取外周血3ml,于4℃下4000 r/min离心20min后取上清液,-70℃冰箱保存备用,用于检测血清中二胺氧化酶(DAO)及小肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)的含量;取回盲部近端肠管,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肠黏膜细胞凋亡情况,HE染色法观察肠组织病理损伤情况。采用SPSS16.0统计软件,计量资料结果以均值±标准差(Xˉ±SD)表示,组间比较采用t检验法,P<0.05提示差异有统计学意义。结果1.各组SD大鼠肠组织病理形态学改变SO组大鼠肠绒毛完整,排列整齐,镜下无中性粒细胞浸润;I/R组可见上皮细胞脱落,绒毛尖端上皮抬高与固有层分离,可见散在的溃疡和出血灶,并有大量的中性粒细胞浸润;RES组肠黏膜绒毛损伤相对较轻,坏死、脱落少见,镜下中性粒细胞浸润轻。2.各组SD大鼠血清中DAO、IFABP含量变化I/R组血清中DAO的含量为(2.92±0.30)U/ml,较SO组(0. 63±0. 15)U/ml显著增加(P<0.05),而RES组(1.65±0.24)U/ml与I/R组比较则显著减少(P<0.05)。I/R组血清中IFABP的含量为(1443.76±174.62) ng/ml,较SO组(26.76±4.86)ng/ml显著增加(P<0.05),而RES组(845.12±123.86)ng/ml与I/R组比较,则显著减少(P<0.05)。3.各组SD大鼠肠粘膜上皮细胞凋亡率(AI)的变化SO组大鼠小肠绒毛顶部、固有层和黏膜下层只有少量散在分布的凋亡阳性细胞;I/R组大鼠肠黏膜凋亡阳性细胞数量明显增加(P<0.05),分布范围从绒毛顶部扩大到中、底部,固有层和黏膜下层,细胞凋亡亦明显加重;RES组大鼠肠黏膜细胞凋亡率明显低于I/R组(P<0.05)。结论1.肠缺血再灌注后肠黏膜形态严重受损,肠黏膜通透性增高,小肠黏膜细胞凋亡增多。2.白藜芦醇可以明显减轻肠缺血再灌注大鼠小肠黏膜的损伤程度,降低肠黏膜通透性,抑制肠黏膜细胞凋亡,对肠黏膜屏障具有保护作用。
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