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外排体(exoxome)是来源于真核细胞的纳米级小囊泡,含有多种生物活性分子,在细胞间物质和信息交流中发挥重要作用。最近的研究资料显示,外排体也是人和鼠源细胞小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)和微小RNA (microRNA,miRNA)的传递机制之一,但能否在猪等哺乳动物细胞间传递尚无报道。为了阐明外排体能否在猪源细胞间传递干扰RNA,本研究首先构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)3’非翻译区(UTR)特异性人工miRNA (amiRNA)的重组腺病毒rAd-amiR3UTR-EIRES-GFP和表达对照amiRNA的重组腺病毒rAd-amiRcon-EIRES-GFP。电镜观察结果显示两种重组腺病毒具有典型的腺病毒形态；经PCR检测证明重组病毒基因组含amiRNA表达盒；经RT-PCR检测证明重组腺病毒能感染猪源细胞并表达序列特异性amiRNA。分别用rAd-amiR3UTR-EIRES-GFP和rAd-amiRcon-EIRES-GFP感染PK-15细胞系、3D4/21细胞系和原代PAM细胞,从感染细胞提取总RNA,用RT-PCR检测amiRNA表达。用腺病毒感染PK-15和3D4/21细胞系,培养三天后分别收集细胞和上清,并从上清中提取外排体,用半定量RT-PCR进行amiRNA检测。24孔板培养PAM细胞,分别加入腺病毒感染PK-15细胞源和3D4/21细胞源外排体,细胞继续培养48h后用PRRSV感染,感染后24h用PRRSV免疫血清进行免疫荧光检测,并收获病毒在MARC-145细胞上进行TCID50测定。结果显示：重组腺病毒感染的PK-15和3D4/21细胞都能表达序列特异的amiRNA,并能以外排体方式分泌；分泌的含amiRNA外排体能传递给PAM细胞,并具有一定的抗病毒作用,PK-15细胞源外排体处理组的PRRSV滴度降低1.54log,3D4/21细胞源外排体处理组的病毒滴度降低1.13log。这些研究结果表明,外排体能介导序列特异miRNA在猪细胞间传递,并发挥抗病毒作用。