IGF-I/mTOR信号通路调控猪骨骼肌卫星细胞增殖期生长差异的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leizi525
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为研究IGF-I/mTOR信号通路调控蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞生长差异的机制,本试验以原代培养蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞为模型,应用MTT法、流式细胞仪周期分析法、HE染色、RIA、RT-PCR和Western Blot等手段对卫星细胞增殖、生长等生物学特性和mTOR通路激活情况进行分析比较;并通过外源补充和添加IGF-I培养细胞研究IGF-I通过mTOR通路对卫星细胞生长的调控。  试验结果表明:  (1)接种后72h,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞的细胞数目开始显著地高于长白猪(P<0.05);流式细胞仪检测细胞周期发现,接种后72h时,蓝塘猪骨骼肌卫星细胞在细胞周期中S期和G2/M期的细胞数目百分比均显著高于长白猪(P<0.05);而长白猪卫星细胞的形态显著大于蓝塘猪卫星细胞(P<0.05);  (2)接种后72h,mTOR通路上PI3K、Akt、TSC2、mTOR、eIF4E、S6K和RPS6基因mRNA丰度在长白猪骨骼肌卫星细胞中的表达均极显著地高于蓝塘猪(P<0.01),蛋白水平上,S6K、p-mTOR和p-eIF4E在长白猪骨骼肌卫星细胞中的表达均显著高于蓝塘猪(P<0.05);同时,细胞培养基上清检测显示,长白猪卫星细胞的IGF-I浓度显著高于蓝塘猪(P<0.05);  (3)以补平剂量添加IGF-I培养蓝塘猪卫星细胞,可以显著促进细胞形态的增大(P<0.05),对细胞增殖无影响(P>0.05),同时Akt和S6K基因的表达丰度显著上调(P<0.05);以高剂量添加IGF-I培养蓝塘猪卫星细胞,既显著促进了细胞形态的增大(P<0.05),又促进了细胞数目的增殖(P<0.05),同时各目的基因的表达丰度均显著上调(P<0.05)。  蓝塘猪和长白猪骨骼肌卫星细胞,在接种后72h细胞生长出现差异,蓝塘猪卫星细胞增殖快,但细胞形态小,同时mTOR通路激活以及自分泌IGF-I水平均弱于长白猪;外源补充IGF-I可以通过mTOR/S6K途径促进蓝塘猪卫星细胞的增大,并且高低剂量IGF-I呈现出不同的作用效果。试验结果提示,两品种猪卫星细胞生长的表型差异与IGF-I/mTOR信号通路激活的差异密切相关。
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