1.全长DPF-1 cDNA筛选、测序和分析;2.p13-Sepharose 4B亲和层析柱的构建

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一、局部免疫和避孕疫苗.二、全长序列的DPF-1 cDNA筛选、测序及分析.以725bp的部分DPF-1 cDNA为模板合成了ⅰα-<32>PⅱdCTP标记的DNA探针;通过两次阳性噬菌斑的筛选,最后得到了18个阳性噬菌斑克隆;通过噬菌体的扩增,λDNA抽提,EcoRI和NotI双酶切,找到了含全长1909bp的DPF-1 cDNA的阳性噬菌斑.将1909bp的外源片段从重组λDNA上切下,与pBluescriptIIKS载体连接,构建成了重组pBluescriptIIKS;用Promega的Erase-a-Base系统获得了相互嵌套的系列缺失体亚克隆;用Pharmacia的Sequencingkit对1909bp的DPF-1 cDNA进行了序列测定;用Genebank, EMBL FASTA Server,SEQENCE LIST 1.0等软件对DNA及演绎出的蛋白质氨基酸序列进行了同源性分析,基元分析和酶切位点分析,证明研究人员所克隆到的DPF-1 cDNA为一新基因.为将来DPF-1的作用机制研究及应用开发打下了坚实基础.三、p13-Sepharose 4B亲和层析柱的构建.培养含sucl重组pRK172质粒的BL21菌株并通过加IPTC,诱导p13的表达.低速离心收集细菌,超声波破碎细胞,超速离心获得含p13的上清液.经凝胶过滤层析获得较纯的p13蛋白,与经CNBr活化的Sepharose 4B进行耦联反应.经乙醇胺封闭活性基团,醋酸缓冲液和耦联缓冲液反复清洗,最终获得了p13-Sepharose 4B亲和层析柱.
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